[发明专利]增强的内毒素检测

说明书

本申请是申请日为2009年8月11日，发明名称为“增强的内毒素检测”的中国专利申请号200980132249.5的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请要求2008年8月18日提交的美国专利申请12/193,169号的优先权，该申请内容的全文以引用的方式并入本文。

背景技术

内毒素，也被称为脂多糖(LPS)，是革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分，并且是在革兰氏阴性菌败血症期间发生的许多毒性效应(即便不是全部)的原因。LPS是由与被称为脂质A的保守的葡萄糖胺类磷脂共价结合的可变多糖结构域构成的糖脂的混合物。LPS直接刺激宿主单核细胞和巨噬细胞分泌许多种炎性细胞因子，这些炎性细胞因子包括肿瘤坏死因子-I(TNF-I)、白介素-1(IL-1)和白介素-8(IL-8)。由宿主巨噬细胞过度释放的这些细胞因子促使在革兰氏阴性菌败血症发作之后出现器官衰竭和死亡。LPS表现的促炎生物活性通常存在于脂质A部分。

发明内容

本文提供检测样本中的革兰氏阴性菌或脂多糖的方法。例如，提供检测样本中的革兰氏阴性菌或脂多糖的方法，该方法包括在非活性酸性蛋白酶存在下使样本与一种或多种脂多糖结合多肽接触，以及确定该一种或多种脂多糖结合多肽是否与样本结合。结合则表明样本中含有革兰氏阴性菌或脂多糖。本文还提供检测样本中的革兰氏阴性菌或脂多糖的方法，该方法包括在导致样本中蛋白质降解的条件下使样本与活性酸性蛋白酶接触，在非活性酸性蛋白酶存在下使样本与一种或多种脂多糖结合多肽接触，以及确定该一种或多种脂多糖结合多肽是否与样本结合。

提供检测样本中革兰氏阴性菌或脂多糖的方法，该方法包括在导致样本中蛋白质降解的条件下使样本与活性酸性蛋白酶接触，进一步使样本与变形细胞溶解物接触，以及确定在变形细胞溶解物中是否发生了凝胶化反应。

提供用于检测样本中革兰氏阴性菌或脂多糖的试剂盒。该试剂盒包含酸性蛋白酶。该试剂盒还包含一种或多种变形细胞溶解物和/或一种或多种脂多糖结合多肽。

下面的附图和说明书中阐明了一方面或多方面的细节。从说明书、附图和权利要求书中将显而易见其它特征、目的和优点。

附图说明

图1A-1D显示用EndoPrep^TM蛋白酶组合物(BioDtech,Inc.,Birmingham,AL)处理肽X。图1A是PPC抑制试验图，显示在内毒素检测中克服肽X的抑制作用所需的肽稀释程度。图1B显示在用EndoPrep^TM蛋白酶组合物处理前和处理后肽X样本中的1EU/ml PPC的回收。图1C显示肽X样本中的确定内毒素污染物的回收。图1D是PAGE凝胶图像，显示用EndoPrep^TM蛋白酶组合物处理的肽X降解。

图2A-2C显示用EndoPrep^TM蛋白酶组合物处理Sushi3肽。图2A是PPC抑制试验图，显示在内毒素检测中克服Sushi3肽的抑制作用所需的肽稀释程度。图2B显示Sushi3肽样本中的确定内毒素污染物的回收。图2C是PAGE凝胶图像，显示用EndoPrep^TM蛋白酶组合物处理的Sushi3肽降解。

图3A-3B显示用EndoPrep^TM蛋白酶组合物处理血红蛋白。图3A显示牛红细胞的血红蛋白样本中的内源性内毒素污染物的回收。图3B是PAGE凝胶图像，显示用EndoPrep^TM蛋白酶组合物处理的血红蛋白降解。凝胶在非还原条件下移动产生三个不同的血红蛋白群。标明了每个血红蛋白群和EndoPrep^TM蛋白酶的位置。

图4A-4B显示用EndoPrep^TM蛋白酶组合物处理BSA。图4A是显示BSA样本中确定的内毒素污染物回收的图。图4B是PAGE凝胶图像，显示用EndoPrep^TM蛋白酶组合物处理的BSA降解。标明了BSA和EndoPrep^TM蛋白酶的位置。