[发明专利]含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法在审
| 申请号： | 201410383229.8 | 申请日： | 2014-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN104131019A | 公开（公告）日： | 2014-11-05 |
| 发明（设计）人： | 许厚强;桓聪聪;陈伟;赵佳福;张雯;周迪 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N15/64 | 分类号： | C12N15/64 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李亮;程新敏 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | myodi 基因 启动子 片段 重组 质粒 构建 方法 | ||
1.一种含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）从牛的血液中提取总DNA，经过PCR扩增得到的不同长度的MyoDI基因启动子片段；
2）将质粒pEGFP-N3经过PCR扩增后，获得不含启动子区的pEGFP-N3载体片段；
3）将不含启动子区的pEGFP-N3载体片段与不同长度的MyoDI基因启动子片段进行平末端连接；
4）将连接产物转化到E.coli DH5α细胞，筛选出阳性克隆子，经测序验证获得重组载体。
2.根据权利要求1所述的含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法，其特征在于：步骤1）中用于PCR扩增MyoDI基因启动子的引物为4对5'端加磷的引物：引物P1的上游引物的序列为5'-ACCTCCCGACATCATAC-3'，引物P1的下游引物的序列为5'-GGTTTGGGTTGCTAGACG-3'；引物P2的上游引物的序列为5'-GTGGAGTTCCGCTTGTTG-3'，引物P2的下游引物的序列为5'-CTCCCCACCCCTACTTTC-3'；引物P3的上游引物的序列为5'-CTCCCTGATTCGGTAGATC-3'，引物P3的下游引物的序列为5'-CTCCCCACCCCTACTTTC-3'；引物P4的上游引物的序列为5'-CTCCCTGCTCTGTTCCTATT-3'，引物P4的下游引物的序列为5'-CTCCCCACCCCTACTTTC-3'。
3.根据权利要求1所述的含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法，其特征在于：步骤2）中PCR扩增用的上游引物的序列为5'-GCTAGCGCTACCGGACTCAGAT-3'，下游引物的序列为5'- ATTA ATAAC TAATGCATGGCGG-3'。
4.根据权利要求1所述的含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法，其特征在于：步骤1）和步骤2）中PCR扩增所用的酶为高保真DNA聚合酶。
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