[发明专利]双链RNA或其修饰物在制备肿瘤抑制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中双链RNA或其修饰物在制备肿瘤抑制剂中的应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是一种分子生物学上与靶基因序列同源的短双链RNA(dsRNA)诱导的序列特异性的特别有效的转录后基因沉默现象(Fire，1998)，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。RNAi是真核细胞特有的一种基因沉默机制，在决定细胞命运、细胞分化方向及存留等方面起着极为重要的作用。由于RNAi具有锁定任何引起疾病或疾病相关蛋白表达的能力，且RNAi技术特异性高，作用迅速，副反应小，在有效地沉默靶基因的同时，对细胞本身的调控系统没有影响。目前RNAi已作为一种高效的序列特异性基因剔除技术在传染性疾病和恶性肿瘤基因治疗领域发展极为迅速。

微小核酸(miRNA)是一种内源的、在体内广泛表达的包含21～25个核苷酸的内源性非编码小RNA，是引起RNA干扰现象直接原因的物质之一。miRNA由具有发夹结构的约70～90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，在进化上高度保守，通过翻译抑制调控基因表达而不影响转录本的稳定性。每个miRNA可以有多个调控(靶)基因，而几个miRNA也可以调节同一个基因，据推测，miRNA调节着人类三分之一的基因。miRNA调节机体重要的生理与病理过程，在细胞分化，生物发育及疾病发生发展过程中发挥巨大作用，且具有很强的组织特异性，已经引起越来越多的研究人员的关注。

周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependent kinase 4，CDK4)作为一种重要的周期蛋白。研究表明肿瘤细胞恶性增殖主要是由于细胞周期的失调所导致，Cyclin D-CDK4/CDK6是调控细胞周期由G1向S期的过渡关键因子。CDK4基因己被证实是一种癌基因，与肿瘤的发生、发展及患者的预后密切相关。在多种肿瘤细胞如胃癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、子宫内膜癌、肝癌和癌变组织中都发现伴随有CDK4的过度表达和过度活化现象，因此CDK4可做为肿瘤基因治疗中的一个潜在靶点。

此外G1期是增殖细胞唯一能接受从外界传入的增殖或抑制增殖信号的时期，作用在G1期或G1/S交界期，启动细胞周期和促进DNA合成的cyclin D是一个比其它cyclins更加敏感的指标。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何抑制肿瘤细胞和/或抑制肿瘤。所述抑制肿瘤细胞可为抑制肿瘤细胞增殖，所述抑制肿瘤可为抑制肿瘤的发生和/或抑制肿瘤的生长。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种双链RNA或其修饰物在制备肿瘤抑制剂或肿瘤细胞抑制剂中的应用，所述双链RNA，其名称为dsRNA21，所述dsRNA21的一条链的从5’端至3’端的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.1，所述dsRNA21的另一条链的从3’端至5’端的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.2。

其中，SEQ ID No.1由21个核糖核苷酸组成，SEQ ID No.2由21个核糖核苷酸组成，SEQ ID No.1的第1-19位核糖核苷酸与SEQ ID No.2的第3-21位核糖核苷酸反向互补，将二者形成的双链RNA命名为dsRNA21。

上述应用中，所述修饰物具体可为对所述dsRNA21进行修饰得到的双链RNA修饰物，其名称为dsRNA21-mimic。所述双链RNA修饰物中，各种修饰方法均可选用，包括选自核糖修饰、碱基修饰和磷酸骨架修饰中的一种或几种的组合等。如可对所述dsRNA21进行下述A1)或A2)或A3)的修饰得到所述双链RNA修饰物：

A1)对所述dsRNA21的核糖的2′-OH进行修饰；

A2)对所述dsRNA21的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰；

A3)对所述dsRNA21的核糖的5′端连上胆固醇的修饰。

上述应用中，所述对所述dsRNA21的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰为将所述磷酸二酯键的氧用硫取代；所述对所述dsRNA21的核糖的2′-OH进行修饰为将所述2′-OH用甲氧基或氟取代或者对所述2′-OH进行脱氧修饰。

在本发明的一个实施例中，所述双链RNA修饰物是将所述dsRNA21的SEQ ID No.2所示链中所有胞苷酸的2′-OH均取代为甲氧基且SEQ ID No.1所示链未进行修饰得到的修饰物，其名称为2′-OMe-dsRNA21。