[发明专利]对索拉非尼具有耐药性或敏感性的人肝癌细胞系及其应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞系领域，特别涉及对索拉非尼具有耐药性或敏感性的人肝癌细胞系及其应用。

背景技术

原发性肝癌具有发病例高、预后较差及病死率高等特点，是常见的恶性肿瘤的一种。据最新的统计数据，肝癌全球新发例数约74.8万，死亡病例69.6万，而其中半数发生在中国。其发病例和死亡率在男性肿瘤患者中分别居于第5位，第2位；在女性肿瘤患者中分别居于第7位和第6位(JemalA,BrayF,CenterMM,FerlayJ,WardE,FormanD.Globalcancerstatistics,2011.CACancerJClin2011；61(2):69-90.陈建国,陈万青,张思维,郑荣寿,朱健,张永辉.中国2003-2007年肝癌发病率与死亡率分析.中华流行病学杂志2012；33(6):547-53.)。

原发性肝癌起病隐匿，早期缺乏典型症状，早期诊断较困难，病程发展快，进展迅速，确诊时大多数患者已经达到局部晚期或发生远处转移，治疗困难，预后很差，严重地威胁人民群众的身体健康和生命安全。手术切除和肝移植是肝癌首选的治疗方法，但是大部分患者(60-70％)确诊时时已经是晚期，失去手术治疗机会，只能采用其他治疗方案，包括局部消融，肝动脉介入治疗(化疗和栓塞)，放射治疗，系统性治疗(靶向药物索拉非尼，以细胞毒药物阿霉素和奥沙利铂为主的联合治疗方案)，中医药治疗以及免疫治疗等，其中化学药物治疗起着重要作用。但是，传统的化疗方案(如阿霉素，铂类药物等)很难有效延长晚期肝癌患者的生存期。

索拉非尼(sorafenib，商品名：多吉美，Nexavar)是一种多靶点抑制剂，它能抑制Raf激酶的活性，阻断下游ERK激酶的磷酸化，从而抑制肿瘤细胞的增值；同时它还靶向血管内皮生长因子受体(Vascularendothelialgrowthfactorreceptor,VEGFR)和血小板衍生生长因子受体(plateletderivedgrowthfactorreceptor,PDGFR)，从而抑制肿瘤的血管新生。索拉非尼能抑制肝癌细胞系的体外增殖，并能抑制这些细胞的体内肿瘤生长。在两个大型Ⅲ期临床实验中(SHARP和Oriental)，索拉非尼的治疗都明显提高了患者的总生存期和疾病进展时间。因此，2007年美国FDA和欧洲EAMA相继批准其用于治疗晚期不能手术的肝细胞肝癌，2008年中国SFDA批准其用于肝癌治疗，是目前临床用于晚期肝细胞肝癌患者的标准化疗药物。

然而，索拉非尼的治疗效果比较短暂，只能延长患者数月的总生存期；大多数患者在接受给药初期，表现良好效果；但是长期治疗后，肿瘤会出现耐药，并重新生长，疾病进展，治疗失败。因此，建立对索拉非尼耐药的肝癌模型，并探索相关耐药机制，具有极其重大的科研价值和临床意义。目前，对索拉非尼的耐药机制研究处于起步阶段，并且集中在体外耐药细胞系模型上，对体内耐药的动物模型尚无明确报道。有研究团队用索拉非尼在细胞水平长期作用于肝癌细胞系，诱导细胞耐药性发生，并和亲本细胞进行比较，寻找体外耐药机制，发现耐药细胞出现Akt和STAT-3等信号通路的激活，以及EGFR/HER-3受体的过度活化，或者出现间质-上皮转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)等，但是并没有比较体外诱导耐药细胞在体内对索拉非尼的反应性。而在体内模型中，有研究团队将人肝癌细胞系Hep3B接种到免疫缺陷小鼠体内，进行索拉非尼长期给药，诱导体内耐药产生；但是他们发现这种耐药性是不稳定的而是可以产生逆转的。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题就是针对目前对索拉非尼耐药的临床前肝癌模型匮乏，难以深入研究肝癌细胞对索拉非尼的耐药机制以及逆转药物开发这一技术难题，提供了对索拉非尼具有耐药性或敏感性的人肝癌细胞系及其应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之一是：一种对索拉非尼具有耐药性的人肝癌细胞系，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2013181。

本发明所述人肝癌细胞系较佳地还包括如上所述的人肝癌细胞系的子代细胞系。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之二是：如上所述的人肝癌细胞系在制备使免疫缺陷哺乳动物产生肝癌的试剂中的用途。