[发明专利]一种烟草小苗期快速鉴定黑胫病抗性的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物抗病性鉴定技术领域，具体涉及烟草黑胫病抗性鉴定方法。

背景技术

烟草黑胫病是烟草生产上最具毁灭性的病害之一，同时也是世界烟草生产中危害最严重的病害之一，该病在我国各产烟省均有不同程度的发生，且危害较为普遍和严重。选用烟草抗黑胫病品种是解决这一病害的重要途径。

目前，现有的烟草品种抗病性鉴定方法主要有田间黑胫病圃鉴定法和苗期鉴定方法。田间黑胫病圃鉴定法由于受地力、季节，每年的鉴定品种数量受到很大限制，且年份间鉴定的品种抗性有一定的差异；而现有的苗期鉴定方法都要育苗后移栽到花盆、室内病圃中或移植到新的盘上，缺点是移栽缓苗后接种，时间长，工作量大。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种小苗不移栽/移植的鉴定方法，不人为创造伤口，更加快捷方便，经过多年的田间病圃鉴定与本发明方法的同步对比验证，本发明鉴定结果与田间鉴定相当，且年度间差异小，鉴定时间短，工作量少。

本发明采用的技术方案：小苗快速鉴定法在温室中进行，温度环境25℃。将待鉴定的各烟草品种播种到54孔育苗穴盘中育苗，每个品种/系1盘，育苗管理措施同常规烟叶生产。当苗龄达35～45天后（不需剪叶），进行人工接种。对所有供试烟株在穴盘的穴孔中埋入预先培养的黑胫病接种材料0.1～1g。分别在接种后3～10天调查病情分级，计算病情指数。

接种材料的制作：将小米用水煮至6分熟，捞出放到纱布上摊开，沥水10分钟。装入250ml圆形塑料组培瓶中，装至瓶体的2/3处。用高压蒸气灭菌锅121℃灭菌1小时。冷却至室温后，将分离好的在燕麦培养基上的黑胫病菌丝接种到小米上，在培养箱中28℃下培养15天，菌丝长满即可。 

记载方法执行国家标准“烟草病虫害分级及调查方法（GB/T 23222-2008）”。病情指数（D）计算公式：

D=∑（各级病株数×该病级数）×100/（调查总株数×最高级数）

病害严重度分级标准按国家标准GB/T 23224-2008执行， 抗性划分为6个级别：高抗或免疫（I）：病指为0；抗病（R）：抗病（R）；中抗（MR）：病指为20.1～40；中感（MS）：病指为40.1～60；感（S）：病指为60.1～80；高感（HS）：病指为80.1～100。

本发明达到的有益效果：

本发明采用小苗不移栽/移植的鉴定方法，不人为创造伤口，更加快捷方便。经过多年的常规田间病圃鉴定与本发明方法的同步验证，本发明鉴定结果与田间鉴定相当，且年度间差异小。具体表现如下：

（1）鉴定周期更短，35～45天小苗不剪叶即可用于鉴定，整个鉴定周期仅为45～55天即可，比现有的其它鉴定方法的鉴定周期更短，说明本发明的方法更高效；

（2）育种方法不同，其它方法均采用漂浮育苗，移栽后鉴定或移植到新盘上再做鉴定。本方法采用大孔穴盘，有足够空间在原盘上直接鉴定，盘不在营养液中浸泡，更适合固体接种病原接种；

（3）病原接种材料的制作不同。常规的菌谷制作是采用带壳的谷子制作，本方法的采用脱粒后的小米制作，更方便接种，并有利于发病。

（4）黑胫病接种材料所用的小米经过水煮、沥干、消毒、填装在矩形槽体并进行均匀分块，这样在使用时直接按块拿取，这样可以进一步提高试验速率、提高试验规范化程度。

具体实施方式

实施例1

1、材料与方法

1.1、试验材料

贵州省烟草品种/系10份烤烟材料，对照品种革新3号、金星6007、小黄金1025。

1.2、试验方法

1.2.1、常规病圃鉴定法

田间病圃鉴定在贵州省烟草科学研究院烤烟品种试验黑胫病鉴定圃中进行。试验设4个重复，每重复1行，栽烟10株。采用漂浮育苗法，育苗方法同常规生产。剪叶两次，培育成壮苗后，于5月上旬移栽，密度1×0.6m²，亩施纯氮6公斤。其它栽培管理措施同大田生产。设革新3号为抗病对照、金星6007为中抗对照，小黄金1025为感病对照。田间鉴定于移栽后20天，对所有供试烟株进行人工接种，在烟株根部埋入预先培养的黑胫病接种材料3g。分别在接种后20天、40天、60天调查病情分级，取三次调查平均值计算病情指数。

1.2.2、本发明方法