[发明专利]一种利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法

权利要求书

1.一种利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法，其特征在于，步骤如下,

pGEX-4t-GIF重组载体和pMAL-c2x- Rab3A重组载体构建：将人神经生长抑制因子hGIF基因克隆入pGEX-4t-1载体中得到pGEX-4t-GIF重组载体；将Rab3A基因克隆入pMAL-c2x载体中，得到pMAL-c2x- Rab3A重组载体；所述hGIF基因序列见SEQ ID NO:5；所述Rab3A基因序列见SEQ ID NO:6；将所得重组载体导入大肠杆菌表达菌株Rosseta（DE3）中，构建含有重组表达载体的pGEX-4t-GIF基因工程菌和pMAL-c2x- Rab3A基因工程菌；

诱导表达：将所得pGEX-4t-GIF基因工程菌和pMAL-c2x- Rab3A基因工程菌分别培养至OD600=0.5时，加入诱导剂IPTG进行诱导培养；

收集菌体：离心收集诱导表达的菌体，重悬菌体，破碎菌体，离心收集上清；

纯化：纯化所收集的菌体中表达的重组蛋白；

酶切得到重组蛋白：利用凝血酶和Factor Xa分别酶切上述纯化的蛋白，得到重组的hGIF蛋白和重组的Rab3A蛋白。

2.权利要求1所述利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法，其特征在于，所述诱导剂IPTG的浓度为1mmol/L，诱导培养时间为4-6小时。

3.权利要求1所述利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法，其特征在于，所述纯化的方法为GST、MBP标签亲和层析法。

4.权利要求1所述利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法，其特征在于，所述收集菌体中破碎菌体的方法为超声破碎法，其中超声破碎菌体所用功率为全额功率的30%，超声2秒，间隔2秒，作用20分钟。

5.权利要求1所述利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法，其特征在于，所述收集菌体中重悬液为PBS磷酸盐缓冲液。

6.权利要求1所述利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法，其特征在于，所述酶切得到重组蛋白中，室温下，1U的Factor Xa酶切50ug纯化后的pGEX-4t-GIF菌体24小时得到重组的hGIF蛋白；室温下，1U的凝血酶酶切100ug纯化后的pMAL-c2x- Rab3A菌体24小时得到重组的Rab3A蛋白。