[发明专利]一种制备尼莫克汀的方法及其生产菌株

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体地说，涉及一种制备尼莫克汀的方法及其生产菌株。

背景技术

尼莫克汀(Nemadectin)由蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus sp.noncyanogenus)发酵产生，是十六元大环内酯化合物，属于米尔贝霉素族(Milbemycin)抗生素。以尼莫克汀为基础半化学合成的莫西克汀(Moxidectin)，由于在C-23位引入＝N-OCH₃基团，因而亲脂性更强。莫西克汀与伊维菌素(Ivermectin)的作用机制基本相似，但比伊维菌素具有更高的活性。莫西克汀抗寄生虫的特点是：作用强烈，用量少，对人体安全、无毒害、不污染环境，只杀害虫，不杀害虫天敌，且不易产生抗药性。是目前最有前途的广谱、高效、新型、抗虫、无交叉感染的生物杀虫剂，被誉为当今活性最高的杀虫剂之一，是目前应用前景最广阔的抗虫抗生素，市场潜力巨大。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备尼莫克汀的方法及其生产菌株。

为了实现本发明目的，本发明的一种制备尼莫克汀的方法，其是从保藏编号为CGMCC No.8731的蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)BJX003的发酵液中制备尼莫克汀。

前述方法包括以下步骤：

(1)发酵培养：将菌株BJX003的种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，获得发酵液。接种量优选为5～15％(v/v)，所述种子液为培养至对数生长期的种子液。

(2)从发酵液中提取尼莫克汀。

发酵使用的培养基为：葡萄糖40-60g/L、乳糖20-50g/L、酵母粉20-50g/L、磷酸氢二钾1-3g/L、七水硫酸镁0.5-2g/L、氯化钠8.5-12.5g/L和碳酸钙10-30g/L，pH值7.2，以水配制。

优选地，发酵使用的培养基为：葡萄糖50g/L、乳糖35g/L、酵母粉35g/L、磷酸氢二钾2g/L、七水硫酸镁1.2g/L、氯化钠10g/L和碳酸钙20g/L，pH值7.2，以水配制。

发酵培养条件为：25-30℃，相对湿度50-60％，170-210rpm振荡培养192-240h。优选地，发酵培养条件为：28℃，190rpm振荡培养240h，旋转半径为50mm。

本发明还提供蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)BJX003，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCC No.8731，保藏日期2014年1月17日。

本发明的蓝灰链霉菌BJX003的孢子丝短，呈致密的2-3圈螺旋形，孢子卵圆形至短柱形，不易分开，表面光滑。在克氏一号合成培养基中气丝呈粉状，灰色至深灰色，基丝最初无色，后逐渐变蓝，没有可溶性色素。

该菌对D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖、鼠李糖利用效果较好。不利用棉子糖、肌醇、D-甘露醇。可抑制金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌等。

本发明还提供用于PCR特异性检测蓝灰链霉菌BJX003的引物对，包括：

正向引物：5’-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3'

反向引物：5’-GGTACCTTGTTACGACTT-3'

利用上述引物对，可扩增出该菌的16S rDNA序列，其核苷酸序列如Seq ID No.1所示，大小为1289bp。

本发明提供的蓝灰链霉菌菌株BJX003产尼莫克汀能力强，可达3000μg/mL发酵液。而且菌株BJX003经连续传5代后，产尼莫克汀的能力仍保持原有水平，表明其遗传稳定性好。采用本发明的菌株发酵制备尼莫克汀，大大提高了尼莫克汀的产率，操作简单、成本低廉、条件可控，适合于尼莫克汀的大规模生产。

附图说明

图1为本发明蓝灰链霉菌BJX003的菌落形态。

图2为本发明蓝灰链霉菌BJX003的菌丝体形态。

图3为尼莫克汀标准品的色谱图。

图4为本发明菌株BJX003的发酵滤液中尼莫克汀的色谱图。

具体实施方式