[发明专利]一种有序胶原材料及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种有序胶原材料及其制备方法与应用。本发明所提供的有序胶原材料的制备方法，包括如下步骤：1)将胶原膜用体积分数为3％‑10％的醋酸水溶液2‑8℃浸泡48h至2周；2)采用搅拌机进行间歇搅拌，每次搅拌时间为30s，一次搅拌结束后放冰上5min再进行下一次搅拌，重复80‑100次；3)冰上静置30min；4)置于液氮中冷冻5‑10min，取出后再置于‑80℃继续冷冻2h，真空冷冻干燥，得到胶原材料1；5)用EDC和NHS对所述胶原材料1进行交联，得到胶原材料2；6)洗涤所述胶原材料2，真空冷冻干燥，得到所述有序胶原材料。实验证明，将神经细胞接种到本发明所提供的有序胶原材料上，能引导神经元轴突定向延伸。本发明所提供的有序胶原材料对于神经元的修复具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种有序胶原材料及其制备方法与应用。

背景技术

胶原蛋白是来源于动物结缔组织的一种材料，具有良好的生物相容性和可降解性，免疫源性比较低，有一定的机械支撑作用，经常被用来制作支架材料，应用于组织修复。胶原支架材料可以为损伤组织提供一定的支撑作用，有效促进细胞的粘附、增殖和迁移。在神经损伤部位植入特定取向性材料，能诱导损伤两端的神经细胞相向性增殖和迁移，减少细胞迁移的路径，促使神经元突触正确连接。这种有序性的多孔材料不仅能作为细胞移植的载体，也能携带生长因子促进组织损伤修复。

一些溶剂能结晶成骨针状结构，而且在结晶形成过程中，溶质并不参于结晶体的形成，而是被排斥在晶体的四周，通过低温干燥的方法将溶液冻干，便可形成一种中空纵向成孔的结构。

发明内容

本发明的目的是提供一种有序胶原材料及其制备方法与应用。

本发明所提供的有序胶原材料的制备方法，具体可包括如下步骤：

(1)将胶原膜用体积百分含量为3％-10％(如6％)的醋酸水溶液2-8℃(如4℃)浸泡48小时至2周的时间(如72小时)；

其中，所述胶原膜可剪碎处理，剪成大小约为1立方毫米的碎片；另外，在浸泡过程中可多次摇动。从而，促进所述胶原膜的溶解。

(2)采用搅拌机进行间歇搅拌，每次搅拌时间为30秒，一次搅拌结束后放冰上5分钟再进行下一次搅拌，重复80-100次(如90次)(一次搅拌加上随后的一次冰上放置记为一次)；

该步骤是为了使所述胶原膜充分溶解。

(3)冰上静置30分钟；

(4)置于液氮中冷冻5-10分钟，取出后再置于-80℃继续冷冻2小时，然后真空冷冻干燥，得到胶原材料1；

(5)用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)对所述胶原材料1进行交联，得到胶原材料2；

(6)洗涤所述胶原材料2，真空冷冻干燥，得到所述有序胶原材料。

在所述方法的步骤(5)中，对所述胶原材料1进行交联时，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)在交联体系中的终浓度为2mg/ml；所述N-羟基丁二酰 亚胺(NHS)在交联体系中的终浓度为1mg/ml。

在所述方法的步骤(5)中，对所述胶原材料1进行交联时的温度为37℃，时间为4h。

在所述方法的步骤(5)中，对所述胶原材料1进行交联时，所述交联体系中的溶剂为0.05M的2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)水溶液。