[发明专利]一种从鸡血中提取抗菌肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种提取抗菌肽的方法，特别涉及一种从鸡血中提取抗菌肽的方法。

背景技术

目前，随着传统抗生素的滥用，细菌耐药性问题和药物残留问题已日趋严重——甚至出现超级细菌，而这些问题也直接威胁着人类健康乃至整个生物圈的生态平衡，已引起世界极高度的关注，而寻求一种取代传统抗生素的无残留、无耐药性的新型抗菌药物已成为当务之急。抗菌肽具有高效的抑菌效果和广泛而稳定的生物学活性，已经广泛引起人们的兴趣和关注。抗菌肽不仅具有广谱、高效的抗微生物活性，而因其独特的抗菌机理不会使微生物产生耐药性，在机体内无残留，具广阔的开发应用前景，抗菌肽的应用必将带来一场抗生素新的革命。

我国作为世界养鸡业大国，相较于猪血近年来的广泛应用和成本不断提高，鸡血来源丰富、开发不充分、价格低廉，可以满足大规模深化加工的需求，具有很强的开发应用及推广价值。目前在国内外还未见从新鲜鸡血中提取抗菌肽的技术和产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种从鸡血中提取抗菌肽的方法。

本发明所提供的从鸡血中提取抗菌肽的方法，具体可包括如下步骤：

(1)取鸡血，进行血细胞破碎(目的是释放血红蛋白)后加入木瓜蛋白酶进行酶解；

(2)向酶解液中加入乙酸浸提，离心取上清，调节pH至6.0±0.5(如6.0)，获得鸡血抗菌肽粗提物。

在所述方法的步骤(2)之后，还可包括如下步骤(3)：

(3)将所述鸡血抗菌肽粗提物上样于Sephadex G-100凝胶柱，采用洗脱液进行洗脱，收集具有抗菌活性的洗脱峰。

在所述方法的步骤(3)之后，还可包括如下步骤(4)：

(4)将步骤(3)收集的具有抗菌活性的洗脱峰上样于Sephadex G-25凝胶柱，采用洗脱液进行洗脱，收集洗脱峰，获得鸡血抗菌肽。

在所述方法的步骤(1)中，所述木瓜蛋白酶与所述鸡血的配比可为1750-35000U：100ml(如1750-3500U：100ml，具体如3500U:100mL)；所述酶解的温度可为70～90℃(如70℃)，时间可为4～6h(如4h)。另外，在本发明中，所述进行血细胞破碎具体通过采用组织捣碎机搅拌所述鸡血实现的。

在本发明中，所述木瓜蛋白酶的酶活为3500U/mg。相应的，所述木瓜蛋白酶与所述鸡血的配比可为0.5-10mg：100ml(如0.5-1mg：100ml，具体如1mg:100mL)。

在所述方法的步骤(2)中，所述向酶解液中加入乙酸具体可为：向所述酶解液中加入等体积的5％(体积百分含量)的乙酸水溶液；所述浸提具体可为：4～37℃(如4℃～10℃，再如4℃)震荡16-20h(如16h)；所述离心为：6600g-10000g(如10000g)4～10℃(如4℃)离心20min～30min(如20min)。

在所述方法的步骤(3)中，所述洗脱液具体可为：pH为6.0的浓度为0.2mol/L的乙酸钠水溶液；所述洗脱的速度具体可为10.0mL/cm²·h。

在本发明的一个实施例中，步骤(3)的洗脱过程中共产生两个洗脱峰，所述具有抗菌活性的洗脱峰实际为第二个洗脱峰。所述抗菌活性具体体现为抗如下细菌中的至少一种：大肠杆菌(如ACTT 25922)、绿脓杆菌(如ACTT 27853)、嗜水气单胞菌(Genebank ID Sequence ID:gb|KJ156374.1|)。

在所述方法的步骤(4)中，所述洗脱液具体可为：pH为6.0的浓度为0.2mol/L的乙酸钠水溶液；所述洗脱的速度具体可为10.0mL/cm²·h。

在本发明的一个实施例中，步骤(4)的洗脱过程中只产生一个洗脱峰，该洗脱峰即为纯化后的鸡血抗菌肽样品。

在所述方法的步骤(3)中，Sephadex G-100凝胶柱的柱长度和柱内径比为8:1。具体而言，本发明中所采用的Sephadex G-100凝胶柱为Pharmacia公司产品，其产品目录号为17-0061-02)。所述上样的上样量为10ml；所述洗脱的洗脱体积为1-1.5L。

在所述方法的步骤(4)中，Sephadex G-25凝胶柱的柱长度和柱内径比为8:1。具体而言，本发明中所采用的Sephadex G-25凝胶柱为Pharmacia公司产品，其产品目录号为17-0033-1。所述上样的上样量为10ml；所述洗脱的洗脱体积为1-1.5L。