[发明专利]一种叶酸标记的荧光二氧化硅包裹金纳米粒子的制备方法

权利要求书

1.一种叶酸标记的荧光二氧化硅层包覆金纳米粒子的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

步骤1，金纳米粒子(AuNPs)的制备步骤：

步骤1.1，称取0.1mg柠檬酸钠，溶解在10ml去离子水中，得到1％的柠檬酸钠溶液；

步骤1.2，取1％氯金酸溶液1mL，加入99mL去离子水，得到0.01％氯金酸溶液；

步骤1.3，将0.01％氯金酸溶液煮沸，冷凝回流持续搅拌15分钟；

一次性快速1％柠檬酸钠溶液3mL，继续反应30分钟，得到的是粒径约为18nm的AuNPs(C_Au＝0.0038g·L^-1)。

步骤2，TCPP前驱体的制备步骤：

步骤2.1，TCPP溶解在有机溶剂中，浓度为3.75mM，然后加入EDC(15-30mM)，静置20分钟后，加入NHS(15-30mM)，活化TCPP的羧基；反应温度为室温；,

步骤2.2，将APTES(15-30mM)加入上述活化羧基后的TCPP混合液中，室温条件下避光搅拌24h；

步骤2.3，将反应后的产物放入-80℃冰箱过夜，然后在真空冷冻干燥机中冻干12-24h，除去有机溶剂，得到粉末状的TCPP前驱体。

步骤3，二氧化硅包覆金纳米粒子(AuNPsSiO₂)的制备步骤：

步骤3.1,配制1.68-16.8g·L^-1的PVP水溶液，超声振荡15分钟；

步骤3.2,将PVP10溶液(0.65mL)与步骤1制得的金纳米粒子溶液(34.7mL)混合，室温下避光搅拌24h；离心上述反应物，收集沉淀物；

步骤3.3,将离心后的沉淀重悬在乙醇氨水溶液(4.2vol.％氨水溶在乙醇中)中，使得金浓度为0.59g·L^-1；

步骤3.4,迅速将体积为100-500μL的10vol.％TEOS乙醇溶液倒入上述混合液中，室温下剧烈搅拌12h；

步骤3.5,产物用8000rpm转速离心10分钟，用无水乙醇洗去杂质，重复三次，得到二氧化硅包覆金纳米粒子(AuNPsSiO₂)。

步骤4，荧光二氧化硅层包覆金纳米粒子(AuNPsSiO₂-TCPP)的制备步骤：

步骤4.1,将步骤3所得离心后的AuNPsSiO₂重悬在氨水乙醇溶液(5mL无水乙醇，200μL氨水)；

步骤4.2,向混合物中加入步骤2所得的TCPP前驱体，摩尔比为1：1，室温下剧烈搅拌；

步骤4.3,加入TEOS(0.5-2mM)和APTES(0.5-2mM)，室温下避光剧烈搅拌24h；

步骤4.4,将产物用5000-10000rpm转速离心10分钟，用无水乙醇反复洗涤3次，最后重悬在去离子水中，即得到荧光二氧化硅层包覆金纳米粒子(AuNPsSiO₂-TCPP)。

步骤5,叶酸标记的荧光二氧化硅层包覆的金纳米粒子(FA-AuNPsSiO₂-TCPP)的制备过程：

步骤5.1，将叶酸溶解在二甲基亚砜(DMSO)中，浓度为1.0-3.0mM，超声振荡使其完全分散；

步骤5.2，将EDC加入叶酸DMSO溶液中(摩尔比为1:1)，静置20min后，加入NHS(摩尔比为1:1)，室温条件下搅拌1h；

步骤5.3，将步骤4所制得的荧光二氧化硅层包覆金纳米粒子(AuNPsSiO₂-TCPP)加入活化后的叶酸溶液中，室温搅拌3h；

步骤5.4，离心收集反应产物，用PBS缓冲液洗涤三次，重悬在PBS缓冲液并放入4摄氏度冰箱保存，即得到叶酸标记的荧光二氧化硅层包覆的金纳米粒子(FA-AuNPsSiO₂-TCPP)。

2.根据权利要求1所述的TCPP前驱体的制备方法，其特征在于，步骤2.1所述的EDC和NHS的浓度为15-30mM，浓度比为1：1。

3.根据权利要求1所述的TCPP前驱体的制备方法，其特征在于，步骤2.1所述的有机溶剂为甲醇、N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、和乙醇中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的TCPP前驱体的制备方法，其特征在于，步骤2.2中所述的APTES浓度为15-30mM。