[发明专利]一株黑曲霉及其培养方法与应用

权利要求书

1.一株黑曲霉(Aspergillus niger)BLCY-02，2014年07月15日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.9449，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

2.权利要求1所述黑曲霉(Aspergillus niger)BLCY-02的培养方法，其特征在于，步骤如下：

(1)取黑曲霉(Aspergillus niger)BLCY-02接种于固体培养基中，在30～38℃的条件下，活化培养20～30h，制得活化菌株；

(2)取步骤(1)制得的活化菌株，接种于种子培养基中，在30～38℃的条件下，增殖培养20～30h，制得种子液；

(3)取步骤(2)制得的种子液，按体积比1～10％的比例接种于发酵培养基中，在30～38℃，扩大培养20～35h，即得菌体发酵液。

3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中的种子培养基组分如下，均为重量百分比：

硝酸钠0.3％；磷酸氢二钾0.1％；硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.05％；酵母膏1％；蔗糖5％，余量水，pH为4.0～6.0。

4.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中的发酵培养基组分如下，均为重量百分比：

蔗糖10％，酵母膏1％，硝酸钠0.3％，硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.05％，余量水。

5.权利要求1所述黑曲霉(Aspergillus niger)BLCY-02在制备β-果糖基转移酶中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤如下：

(a)取上述制备的菌体发酵液经固液分离，洗涤菌体，合并分离液及洗涤液，制得粗酶液；

(b)将步骤(a)制得的粗酶液置于40～50℃水浴中热变性50～70min，固液分离，取上清液，加入固体硫酸铵，使溶液达到40％的硫酸铵饱和度，冷藏静止2h，固液分离，取上清液，再加入固体硫酸铵，使溶液达到90％的硫酸铵饱和度，冷藏静止2h，固液分离，取沉淀，溶解于pH 7.8、0.05mol/L的磷酸盐缓冲中，经DEAE-纤维素阴离子交换柱层析，收集洗脱液，经超低温真空浓缩，制得β-果糖基转移酶。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤(a)的洗涤菌体为采用pH 7.0、浓度50mmol/L的磷酸缓冲液重悬，然后经固液分离，取液体，制得洗涤液。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤(a)、(b)中的固液分离均为在4℃、10000r/min条件下，离心60min。

9.权利要求5制备的β-果糖基转移酶在制备低聚果糖中的应用。