[发明专利]一种通用弧菌电感受态细胞制备及电转化方法

权利要求书

1.一种通用弧菌电感受态细胞制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将弧菌接种至脑心浸液培养基中，培养至对数生长期，取菌液，离心收集菌体，菌体用洗涤缓冲液洗涤，离心收集菌体，如此用洗涤缓冲液洗涤若干次，收集的菌体重悬于洗涤缓冲液中，由此得到弧菌电感受态细胞；

所述的洗涤缓冲液含有：133-266mM蔗糖、1-5mM 4-羟乙基哌嗪乙磺，溶剂为水。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的通用弧菌电感受态细胞制备方法，具体步骤为：先将弧菌接种至脑心浸液培养基中，30-37℃振荡培养12-16hr，获得种子液，再将种子液以2～8％v/v的接种量接种到新鲜的脑心浸液培养基中，30-37℃振荡培养至OD_600nm＝0.6-0.8，得到培养液，将此培养液置于冰上10～15min，离心去上清，收集菌体，再加入洗涤缓冲液洗涤，离心去上清，收集菌体，再用洗涤缓冲液洗涤，离心去上清，收集菌体，将此菌体重悬于洗涤缓冲液中，由此得到弧菌电感受态细胞。

3.一种通用的弧菌电转化方法，其特征在于，包括以下步骤：

在权利要求1所述的弧菌电感受态细胞中加入质粒DNA，然后转移到预冷电击杯中，将电击杯置于电穿孔仪电击槽中，电击条件：1.2～1.8KV，电容25uF，电击时间5ms，电击后加入到42℃预热的BHI培养基中，置于30-37℃振荡培养1.5-3hr进行恢复生长，恢复生长的菌液接种于BHI培养基琼脂平板中，再按照常规方法进行筛选，获取转化子。