[发明专利]精子制动液及其制备方法在审
申请号: | 201410391000.9 | 申请日: | 2014-08-08 |
公开(公告)号: | CN104130974A | 公开(公告)日: | 2014-11-05 |
发明(设计)人: | 王维华;吕汝举;刘美静;庄巍;王英超 | 申请(专利权)人: | 山东威高新生医疗器械有限公司 |
主分类号: | C12N5/076 | 分类号: | C12N5/076 |
代理公司: | 青岛高晓专利事务所 37104 | 代理人: | 宋文学 |
地址: | 264209 山东省威*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 精子 制动 及其 制备 方法 | ||
技术领域
本发明涉及人工辅助生殖技术,尤其涉及一种精子制动液及其制备方法。
背景技术
精子制动液已广泛应用于试管婴儿技术中。精子制动液的目的是降低精子活动力。精子制动液的用途:在对精子进行显微操作时人为降低精子活动力的培养液。
目前,我国辅助生殖技术中的精子制动液依赖进口成品,成本高且溶液的有效性的好坏不能很好的表现,如果在培养液变质后仍继续使用将对实验或临床操作造成不可逆转的结果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种各项指标达到体外培养液的标准使用安全且易于判断培养液是否变质的精子制动液,为辅助生殖技术提供有力保证。
本发明的精子制动液,包含对精子进行处理培养的组合物、杀菌剂及指示剂。
所述杀菌剂为庆大霉素9.5-10.5mg/L。
所述指示剂为酚红,浓度9.5-10.5mg/L。
所述组合物中包含氯化钠92.815-102.585mmol/L,氯化钾4.465-4.935mmol/L,硫酸镁0.19-0.21mmol/L,氯化钙1.9-2.1 mmol/L,碳酸氢钠3.8-4.2mmol/L,4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES 19.95-22.05mmol/L,葡萄糖2.66-2.94mmol/L,丙酮酸钠0.314-0.347mmol/L、乳酸钠2.2743-2.5137g/L、丙氨酰谷氨酰胺0.95-1.05mmol/L、牛磺酸0.095-0.105mmol/L,非必需氨基酸0.95%-1.05%(v/v),磷酸二氢钾0.352-0.389mmol/L,庆大霉素9.5-10.5 mg/L,酚红9.5-10.5mg/L,人血清白蛋白4.75%-5.25%(v/v),聚乙烯吡咯烷酮PVP 66.5-73.5g/L。
所述非必需氨基酸为L-丙氨酸、 L-天冬酰胺、 L-天冬氨酸 、 L-谷氨酸、甘氨酸、 L-脯氨酸、 L-丝氨酸中的一种或者几种。
精子制动液的溶剂采用超纯水。
本发明的精子制动液的pH=7.20-7.40,渗透压300-330mOsm/Kg。
本发明精子制动液的制备方法,包括下面步骤:
(1)基础液的配制
a、先按照比例称量各组分,并分开放置;
b、先将称量好的组分(除杀菌剂、指示剂、碳酸氢钠、人血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮PVP)溶于超纯水中,溶解过程中遵循先固体后液体,NaHCO3最后加入的原则;
c、向步骤b所得溶液中加入称量好的杀菌剂、指示剂和NaHCO3;
d、检测溶液渗透压和pH值,如果pH值不在范围内则用配制好的盐酸和氢氧化钠溶液调节pH值,并记录最终渗透压和pH值,得到基础液;
(2)精子制动液原液的配制
a、在基础液中加入PVP(PVP学名是聚乙烯吡咯烷酮,一种水溶性的具有高效粘合性的合成聚合物),将加了PVP的基础液在超净工作台下利用0.2μm的滤膜过滤除菌,得到滤液A;
b、在滤液A中加入人血清白蛋白,震荡或搅拌混合均匀,得到精子制动液的原液;
(3)精子制动液原液的处理
a、在无菌环境下对精子制动液原液进行分装封口,得到市售的精子制动液,将其放置冰箱或冷库内保存。
b、取分装好的精子制动液进行检测,检测项目是pH值、渗透压、细胞毒性、皮内刺激、致敏、无菌、热原、细菌内毒素、体外鼠胚试验、精子活力试验来判断精子制动液是否合格。
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