[发明专利]一种CIDE3多肽及其抗体的制备和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物基因工程和医学领域。更具体地，涉及一种CIDE3多肽及其抗体的制备和应用。 

背景技术

DNA断裂因子（DNA Fragmentation Factor，DFF）是参与细胞凋亡的一类重要蛋白因子，是由40KD和45KD的两个亚基构成的异二聚体。细胞死亡激活因子（Cell death activator，CIDE）是一类特殊的DNA断裂因子（DFF）。CIDEs 蛋白与DFF 45KD亚基的N段同源，促进细胞凋亡的发生。现在已知的CIDE蛋白中，人类有CIDE-A、CIDE-B和CIDE3。其中，CIDE3基因于2003年发现，位于人类3p25染色体上，全长约169 kb，其cDNA含有1305个碱基，存在选择性剪切。 

人CIDE3蛋白存在于原发性肝癌HCC（10/37例）、胃腺癌（4/19例）和乳腺癌（1/17例），HCC细胞中人CIDE3蛋白的阳性表达率（10/37例）显著低于癌旁肝细胞（28/29例）（P<0.05），其中各分化阶段HCC细胞（高、中、低分化）中人CIDE3蛋白的阳性表达率分别低于癌旁肝细胞（P<0.05）。由于人CIDE3基因为凋亡相关基因，而凋亡同肿瘤的发生和发展密切相关，这些结果提示人CIDE3基因同肿瘤的发生有一定的相关性。特别是在HCC中人CIDE3蛋白的阳性表达率明显低于癌旁肝细胞，推测有可能是人CIDE3蛋白的表达缺失引起了凋亡功能障碍或同其他基因发挥着协同作用至使肿瘤的发生与发展。综上所述，CIDE3基因与肝癌之间存在着很强的相关性，提示我们，CIDE3可作为肝癌的一种标志物。 

专利200610041899.7公开了一种人CIDE-3蛋白兔抗多克隆抗体，以人CIDE-3蛋白N端172个氨基酸为抗原免疫新西兰白兔获得。该抗体可用于CIDE-3功能的分子生物学及组织学实验研究，但是，其仍存在多肽片段较长，需要重组表达，操作复杂耗时等问题。因此，我们并不满足于此，进一步研究探索CIDE-3蛋白的标记是一项意义重大的研究课题。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有CIDE3标记技术的局限和不足，提供一种CIDE3多肽及其抗体的制备和应用。该CIDE3多肽抗体可特异性识别人肝脏肿瘤标志物CIDE3，可用于肝癌标志物CIDE3的检测，进而用于肝脏肿瘤诊断、鉴别诊断、预测肿瘤转移和预后。 

本发明的目的是提供一种CIDE3多肽。 

本发明的另一目的是提供一种CIDE3多肽的多克隆抗体。 

本发明再一目的是提供上述CIDE3多肽及其抗体在特异性标记人肝脏肿瘤标志物CIDE3中应用。 

本发明上述目的通过以下技术方案予以实现： 

本发明提供了一种CIDE3多肽序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。SEQ ID NO.1所示序列为：C-ATEEGQPPKGKASSL。

本发明还提供了一种偶联蛋白抗原，由SEQ ID NO.1所示序列与载体蛋白偶联获得。 

优选地，所述载体蛋白为匙孔血蓝蛋白（keyhole limpet hemacyanin，KLH）、牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、卵清蛋白（ovalbumin，OVA）或牛甲状腺球蛋白（bovine thyroglobulin，THY）。 

更优选地，所述载体蛋白为匙孔血蓝蛋白。 

另外，本发明还提供了一种多克隆抗体，是以上述偶联蛋白抗原为抗原制备得到的。 

优选地，该多克隆抗体是以上述偶联蛋白抗原免疫兔子制备得到的。 

本发明还提供上述多克隆抗体在标记肝脏肿瘤标志物CIDE3中的应用。 

本发明从GenBank数据库获得一种人CIDE3氨基酸序列NP_001186481.1，是一种脂滴蛋白，由238个氨基酸组成（如SEQ ID NO.2所示），蛋白分子质量26.8KD。 

SEQ ID NO.2所示序列如下：