[发明专利]一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

    本发明涉及一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

缺血性心脏病多由包括粥样硬化病变引致的冠状动脉梗阻或狭窄所致。由于缺血性心脏病有发病突然，死亡率高的特点，发病开始后数小时到24小时，3天到一周内的时间里的早期诊断和对应治疗是决定其救命率高低的主要因素。一般来说，虽然根据心电图S-T段的缺血性抬高和CPK, 心肌肌钙蛋白I, T(cTnI, cTnT)，肌红蛋白(MB)升高等指标可以确诊，但依然有很多的病例难以很快就下以诊断。

特别是测定血清肌红蛋白(MB)虽可作为急性心肌梗死(AMI) 诊断的早期最灵敏的指标，但特异性差，骨骼肌损伤、创伤、肾功能衰竭等疾病，都可导致其升高；心肌肌钙蛋白I, T(cTnI, cTnT),有相对高的特异性，但在一些骨骼肌疾病血中同样也会增高。cTnI不但在急性心肌梗死病人血中增高，在急性肾衰血样标本也有升高。

由于心肌缺血，心肌梗死导致的不同程度的心肌细胞坏死而泄漏到血管中导致血中不同程度的TNNI3K浓度增高。目前血中TNNI3K浓度的检测主要采用酶标法测定，但该检测方法耗时较长、需要较多的血样及特殊的仪器等技术问题。

发明内容

本发明的之一为了解决上述的血中TNNI3K浓度的检测耗时较长、需要较多的血样及特殊的仪器等技术问题，而提供一种检测耗时短、需要血样量少，不需要特殊的仪器的血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒。

本发明的目的之二在于提供上述的一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒的制备方法。

本发明的目的之三在于利用上述的血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒对血中TNNI3K的浓度进行检测的方法。

本发明的技术方案

一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒，含有以下组分：

（1）、浓度为0.1～3μg/mL的鼠抗人TNNI3K单克隆抗体水溶液；

（2）、浓度为1～20μg/mL的羊抗鼠lgG(H+L)抗体水溶液；

（3）、纳米金-羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液

所述的纳米金-羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液中，按质量比计算，即纳米金:羊抗鼠lgG(H+L)抗体为5:0.2～0.24；

（4）、甘油的PBS缓冲液

所述的甘油的PBS缓冲液，即将甘油加入到pH值为7.4磷酸氢二钠水溶液中混合均匀而得，其中甘油的体积百分比浓度为30%；

（5）、带有的小圈的载体

所述的载体为孔径≤0.25μm的多孔的聚偏氟乙烯膜、硝酸纤维素膜、聚苯乙烯膜或乙酸纤维素膜；

所述的小圈的直径为6mm、深度为0.5mm。

上述的一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒的制备方法，具体包括如下步骤：

（1）、用蒸馏水将鼠抗人TNNI3K单克隆抗体溶解，配成浓度为0.1～3μg/mL的鼠抗人TNNI3K单克隆抗体水溶液；

（2）、用蒸馏水将羊抗鼠lgG(H+L)抗体溶解，配成浓度为1～20μg/mL的羊抗鼠lgG(H+L)抗体水溶液；

（3）、纳米金-羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液的制备

①、纳米金溶液的制备

用质量百分比浓度为1％的柠檬酸三钠水溶液与质量百分比浓度为0.01％氯金酸水溶液按体积比计算，即质量百分比浓度为1％的柠檬酸三钠水溶液:质量百分比浓度为0.01％氯金酸水溶液为1.5mL:100mL的比例进行混合后,搅拌反应至所得的反应液为酒红色，冷至室温，然后用浓度为0.05～0.1mol/L的碳酸钾水溶液调节pH值为6.5～8.0，即得纳米金溶液；

②、在步骤①所得的纳米金溶液中加入步骤（2）所得的浓度为1～20μg/mL的羊抗鼠lgG(H+L)抗体水溶液，得到纳米金-羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液； 

纳米金-羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液中，按质量比计算，即纳米金:羊抗鼠lgG(H+L)抗体为5:0.2～0.24；

（4）、甘油的PBS缓冲液的制备

将甘油加入到pH值为7.4磷酸氢二钠水溶液中混合均匀即得甘油的PBS缓冲液，其中甘油的体积百分比浓度为30%；

（5）、带有的小圈的载体的制备

用打孔器在载体上压印出小圈；

所述的载体为孔径≤0.25μm的多孔的聚偏氟乙烯膜、硝酸纤维素膜、聚苯乙烯膜或乙酸纤维素膜；

所述的小圈的直径为6mm、深度为0.5mm。