[发明专利]一种应用于甲基结合蛋白测序中的甲基化DNA富集方法

权利要求书

1.一种应用于甲基结合蛋白测序中的甲基化DNA富集方法，采用甲基化DNA富集试剂盒进行，其特征在于，包含下述步骤：

(1)磁珠的活化与甲基结合蛋白交联反应

将磁珠进行活化，然后使生物素标记的甲基结合蛋白与活化后的磁珠发生交联反应，得到甲基结合蛋白-磁珠复合物；

(2)甲基结合蛋白-磁珠复合物与片段化DNA的孵化

将片段化DNA加入上述步骤(1)得到的甲基结合蛋白-磁珠复合物中，进行孵化，使甲基化DNA与复合物进行特异性地结合；

(3)去除非甲基化DNA

对上述步骤(2)中经孵化的片段化DNA与甲基结合蛋白-磁珠复合物的混合物，用160mM NaCl将磁珠洗脱4遍，再用200mM NaCl洗脱3遍，除去非甲基化DNA；

(4)甲基化DNA洗脱

对上述步骤(3)中得到的去除了非甲基化DNA的混合物，使用2000mMNaCl对磁珠进行洗脱，得到甲基化DNA组份；

(5)乙醇沉淀

采用乙醇沉淀法对上述步骤(4)中洗脱得到的甲基化DNA组份进行沉淀，干燥后以TE缓冲液溶解，即得到富集的甲基化DNA。

2.根据权利要求1所述的甲基化DNA富集方法，其特征在于，所述步骤(1)中进行磁珠的活化时，在DNA样本中加入磁珠的量为1μg DNA/10μl磁珠。

3.根据权利要求1所述的甲基化DNA富集方法，其特征在于，所述步骤(1)中使生物素标记的甲基结合蛋白与活化后的磁珠发生交联反应时，所使用的生物素标记的甲基结合蛋白的量为1μgDNA/7μl生物素标记的甲基结合蛋白。

4.根据权利要求1所述的甲基化DNA富集方法，其特征在于，所述步骤(2)中使片段化DNA与甲基结合蛋白-磁珠复合物进行孵化时，在室温下进行孵化。

5.根据权利要求1所述的甲基化DNA富集方法，其特征在于，所述步骤(2)中使片段化DNA与甲基结合蛋白-磁珠复合物进行孵化时，孵化时间为1小时。

6.根据权利要求1所述的甲基化DNA富集方法，其特征在于，所述步骤(3)中以200mM NaCl洗脱时，每次加入200mM NaCl的量为200微升。

7.根据权利要求1所述的甲基化DNA富集方法，其特征在于，所述步骤(4)中以用2000mM的NaCl洗脱3遍。

8.根据权利要求1所述的甲基化DNA富集方法，其特征在于，所述步骤(5)中，乙醇沉淀法中所使用的乙醇的体积浓度为70％。

9.根据权利要求1所述的甲基化DNA富集方法，其特征在于，所述步骤(5)中的干燥在室温下进行。

10.根据权利要求1所述的甲基化DNA富集方法，其特征在于，所述步骤(5)中的干燥时间小于5分钟。