[发明专利]一种检测二氮杂双环壬烷对映异构体的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域,具体涉及一种检测(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷对映异构体的方法。

背景技术

(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷为合成喹诺酮类抗菌药物的常用中间体或者起始原料，其分子式为C7H14N2，结构式为

该分子中含有2个手性中心，理论上存在4个光学异构体，但结合其合成方法及反应机理分析最有可能存在的只有对映异构体，即(R,R)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷，该杂质可通过后续反应，残留在喹诺酮类药物中，影响药品质量。因此控制(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷中对映异构体的含量，对提高喹诺酮类药物的质量、保证广大患者用药的安全性具有重要意义。

对于(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷的对映异构体杂质，在药物合成过程当中是需要进行质量控制的。含手性碳原子的光学异构体的分离一直是药物合成和制剂过程中质量控制的难点，经文献检索，未见(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷对映异构体检测方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分析分离(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷及其对映异构体杂质的柱前衍生高效液相色谱法，从而实现(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷及其对映异构体杂质的分离测定。

发明人发现，以直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂的手性色谱柱，以正己烷-低级醇-胺类溶剂混合溶液为流动相，可以将(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷及其对映异构体进行有效分离，从而可以准确控制(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷的质量。

进一步地，先用以直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂的手性色谱柱AD-H(CHIRALPAK，250×4.6mm,5μm)，可以获得更好的分析分离效果。

进一步地，本发明的正己烷-低级醇-胺类溶剂混合溶液为正己烷-无水乙醇-三乙胺的混合溶液。

本发明的方法中的流动相选用体积比例为正己烷-无水乙醇-三乙胺的体积比为(55～75)︰(25～45)︰(0.05～1)。优选正己烷-无水乙醇-三乙胺的体积比为65︰35︰0.1。

本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现：

(1)取邻氟硝基苯0.84～1.26ml置于25ml量瓶中，用10ml二氯甲烷溶解，精密加入三乙胺1.65～2.47ml，作为溶液A；取SS构型样品0.5～0.75g置25ml量瓶中，用二氯甲烷10ml溶解，作为溶液B；将溶液B加入溶液A中，并用二氯甲烷定容至刻度，水浴25～35℃加热60～90min，作为溶液C；精密量取溶液C0.2～0.4ml，置于25ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液；

(2)设置流动相流速为0.4～0.6ml/min，检测波长为246nm，色谱柱柱温箱为25～35℃；

(3)取步骤(1)的样品溶液10～30μl注入液相色谱仪，完成(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷及其对映异构体的分析与分离。

其中：

色谱柱：以直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂的手性色谱柱AD-H(CHIRALPAK，250×4.6mm,5μm)；

流动相：正己烷-无水乙醇-三乙胺＝65︰35︰0.1；

柱温：30℃；

检测波长：246nm；

流速：0.5ml/min；

进样体积：20μl。

本发明采用AD-H(CHIRALPAK，250×4.6mm,5μm)，以直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂的手性色谱柱，能够有效的分析分离(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷及其对映异构体(杂质)。本发明解决了含(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷及其对映异构体的原料的分析与分离问题从而确保了(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷的质量可控。

附图说明

图1：正己烷-无水乙醇-三乙胺＝65︰35︰0.1，柱温30℃的HPLC图：

图中色谱峰1为异构体(R,R)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷，色谱峰2为(S,S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬烷。

图2：正己烷-无水乙醇-三乙胺＝65︰35︰0.1，柱温35℃的HPLC图：