[发明专利]月桂酸修饰SOD的应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种月桂酸修饰SOD的应用方法。

背景技术

超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，简称SOD)是一类广泛存在于生物体内的金属酶，是催化超氧阴离子自由基(O·₂^-)歧化反应的酶类，是超氧阴离子自由基(O·₂^-)的清除剂，也是一种具有重要临床应用价值的药用酶，它能治疗被超氧阴离子自由基(O·₂^-)伤害的有关疾病。临床上用于治疗氧自由基诱发的肿瘤，炎症，缺血-再灌注损伤，氧中毒、帕金斯综合症，老年痴呆症，类风湿关节炎、衰老、多种皮肤病等。

天然的SOD存在着半衰期短、稳定性较差、长期存放失活、遇热失活、具有免疫原性等问题。上述问题国内外均主要通过对SOD进行化学修饰解决。主要修饰剂为聚乙二醇、多糖类物质、小分子脂肪酸等，但大分子修饰的SOD不易透过皮肤与细胞膜。

阎家麒等(阎家麒，谢文正,月桂酸修饰超氧化物歧化酶的制备及其性质研究，生物化学与生物物理进展，1994，21(2)：154-157)报道采用月桂酸修饰牛血SOD的方法，采用氯化亚砜作为活化剂，使用了催化剂吡啶DMF活化月桂酸，活性回收率为93％，修饰率为80％。但吡啶属于有毒类物质，体系中尽量不要引入这种物质。

目前，尚未见修饰SOD应用于职业性皮肤病防治的报道。采用SOD防治职业性皮肤病必须解决SOD长期放置、耐热、易于透过皮肤等问题，且修饰剂及修饰过程采用的催化剂等必须无毒。本发明有针对性的解决了该问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有技术中存在有毒物质掺入、长期放置活性短、耐热性差的问题，提供一种新的月桂酸修饰SOD的应用方法。该方法用于职业性皮肤病防治中，具有制备过程无有毒物质掺入、耐热性好、长期放置活性长的优点。

为解决上述问题，本发明采用的技术方案如下：一种月桂酸修饰SOD的应用方法，用于职业性皮肤病防治中，所述月桂酸修饰SOD的制备主要包括以下步骤：(1)活化月桂酸修饰剂的合成：月桂酸和氯化亚砜在50～140℃下反应，待至少80％的月桂酸转化后稳定回流，然后通过减压蒸馏收集到124～127℃的馏分，即为活化月桂酸修饰剂；(2)月桂酸修饰SOD的制备：将牛血SOD溶于缓冲液中，配制成SOD溶液，加入活化月桂酸修饰剂，在30～50℃下搅拌反应后急冷终止反应，得到月桂酸修饰SOD产品。

上述技术方案中，优选地，所述月桂酸在50～60℃水浴中溶化后加入氯化亚砜，在65～135℃下反应，待90％月桂酸已转化后，再稳定回流0.5～2.5h。

上述技术方案中，优选地，步骤(1)中通过减压蒸馏，蒸去多余的未反应物，然后继续蒸馏，收集110～134℃馏分，通过蒸馏在110～134℃馏分，弃去140℃以上馏分，再重蒸馏，进一步提取124～127℃的馏分，得到活化月桂酸。

上述技术方案中，优选地，所述缓冲液为磷酸氢钾或四硼酸钠中的至少一种。

上述技术方案中，优选地，所述步骤(1)中制备的活化月桂酸修饰剂待用时需放置于冰箱中。

上述技术方案中，优选地，所述步骤(2)中的SOD溶液中的SOD浓度为2～5mg/ml，加入活化月桂酸修饰剂，在35～45℃下搅拌反应0.5～1.5小时后急冷终止反应。

上述技术方案中，优选地，所述步骤(2)中的活化月桂酸修饰剂与SOD的重量比为1～20：1。

上述技术方案中，优选地，所述步骤(2)中用冷水浴终止反应；步骤(1)的反应压力为常压，步骤(2)的反应压力以表压计为常压。

上述技术方案中，优选地，所述月桂酸修饰SOD用于皮肤的护肤、防晒中。

本专利所述的月桂酸修饰SOD的制备过程没有采用有毒的催化剂，制备的月桂酸修饰SOD比活达到2950U/mg，修饰率为80％(采用三硝基苯磺酸TNBS法测定)，月桂酸修饰SOD溶液在20℃条件下，酶活性至少可保存2.5年，用于职业性皮肤病防治中，具有较好的技术效果。

下面通过实施例对本发明作进一步的阐述，但不仅限于本实施例。

具体实施方式

【实施例1】

(1)活化月桂酸修饰剂的合成