[发明专利]屋尘螨过敏原特异性IgE抗体定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及屋尘螨过敏原特异性IgE抗体（定量）检测试剂盒及其制备方法，用于体外定量测定人血清中的针对屋尘螨过敏原特异性的IgE抗体的含量。

背景技术

屋尘螨是常见的吸入性过敏原（因此，屋尘螨特异性IgE抗体的检测通常被称之为屋尘螨过敏原的检测），其所能引起的过敏症状多为呼吸道的相关病症，其检测结果对于我们日常生活的改善紧密相关。

尘螨是诱发过敏性哮喘、过敏性鼻炎和湿疹过敏性结膜炎等过敏性疾病的重要变应原。近年研究证实尘螨与过敏性疾病关系密切，根据美国、新西兰和澳大利亚等许多国家的调查相继证实了尘螨是许多国家重要的过敏原之一。目前全球已有几百项研究证实了尘螨与哮喘等过敏性疾病之间的密切关系。

尘螨过敏的诊断主要依赖免疫学检测。目前临床上有许多体内和体外的免疫学检测方法，包括尘螨变应原皮肤试验、血清尘螨特异性 IgE测定、尘螨支气管或鼻腔激发试验、肥大细胞脱颗粒试验、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白水平测定等。尘螨过敏患者的血清特异性抗体水平增高。可通过ELISA 或RAST方法检测尘螨特异性抗体。有临床意义的指标包括特异性IgE、IgG和 IgA抗体。检测特异性抗体水平可以帮助确诊尘螨过敏及其过敏程度，同时可作为临床疗效评价的指标。

目前临床多采用的ELISA方法，由于其局限性，检测灵敏度和准确性远不如化学发光的方法，而且我们克服了ELISA的非均相反应所带来的本底高特异性不好的缺点。

过敏性疾病是指由变态反应机制引起的疾病。变态反应又称超敏反应，是免疫机体再次接触相同变应原时发生的反应过渡剧烈而引起生理功能紊乱和（或）组织损伤的病理性免疫反应。变态反应性疾病（又称过敏性疾病）包括特应性皮炎、食物过敏、变应性鼻炎和过敏性哮喘等，其发病率日益增高，且病情逐趋复杂化。WHO已将变态反应性疾病列为21世纪重点研究和防治的疾病。近年，随着免疫组化、分子生物学技术和临床新技术，如纤维支气管镜的开展，已对该病达成共识，即其属于过敏性炎症，在炎症区有大量炎症细胞（包括嗜酸粒细胞、淋巴细胞、肥大细胞、嗜碱粒细胞等）浸润。该病的发病主要涉及过敏原、抗体、细胞、受体和介质 5 个环节。当过敏原激发后，在 15-20 分钟所发生的速发相反应主要与肥大细胞有关，而在激发后 4-24 小时所发生的迟发相反应则被认为有嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞参与。这两个时相的反应均依赖于 T 淋巴细胞，特别是辅助 T 细胞（TH）中的一个亚型 TH2。过敏原是引起过敏性炎症的原因，因此若能发现致敏变应原种类，则对防治过敏性疾病有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度高、特异性强、操作简单的屋尘螨过敏原特异性IgE抗体定量检测试剂盒、其制备及其使用方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种屋尘螨过敏原特异性IgE抗体定量检测试剂盒，所述试剂盒含有如下组分：磁分离试剂，过敏原试剂，酶反应物，校准品、质控品，浓缩清洗液，底物A液和底物B液；其中，过敏原试剂含有生物素标记的特异性过敏原，磁分离试剂含有包被有抗人IgE抗体的磁微粒，所述底物A液为含鲁米诺试剂，底物B液为含过氧化物试剂，所述酶反应物为辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素试剂。所述浓缩清洗液为含有吐温的磷酸盐缓冲液浓缩清洗试剂。

一种屋尘螨过敏原特异性IgE抗体定量检测试剂盒的制备方法，其中制备过程如下：

步骤一、磁分离试剂的制备

一、磁微粒缓冲液配制

（1）、称取TRIS （三羟甲基氨基甲烷）4.58g/L，NaCl   6.81g/L，TRITON X-100（聚乙二醇单辛基苯基醚）0.5ml/L于1L容器中；（2）、量取防腐剂Proclin-300    0.5-1ml于1L容器中；量取800ml纯化水于上述容器，充分搅拌；（3）、调节pH值到7.95-8.05之间；（4）、称取牛血清白蛋白BSA 3-5g至上述1L容器中；（5）、最后定容至 1000ml，0.22μm 微孔滤器过滤；做好标记于2-8℃冷库贮存。

二、磁分离试剂的制备