[发明专利]一种抗体修饰的纳米银及其试剂盒与应用

权利要求书

1.一种抗体修饰的纳米银，其特征在于：它以直径为10～30nm的纳米银球为内核，纳米银球外表面吸附有羊抗鼠IgG。

2.权利要求1所述的一种抗体修饰的纳米银的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)在冰浴条件下，将聚乙烯吡咯烷酮溶液加入硼氢化钠溶液中，搅拌并逐滴加入硝酸银溶液，继续搅拌至室温，得纳米银溶液；

(2)将羊抗鼠IgG抗体溶液加入至纳米银溶液中，于冰箱中过夜反应；

(3)将步骤(2)反应体系的上清液离心，沉淀加入BSA缓冲溶液重悬，重复离心与重悬的步骤1～3次；最后离心得到的沉淀用1mg/mL BSA溶液重悬即得。

3.根据权利要求2所述的一种抗体修饰的纳米银的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，硝酸银溶液浓度为2-20mmol/L；硼氢化钠溶液的浓度为3-30mmol/L；聚乙烯吡咯烷酮的浓度为0～5％；硝酸银溶液、硼氢化钠溶液、聚乙烯吡咯烷酮溶液的体积比为1：(1-10)：(0-1)。

4.根据权利要求2所述的一种抗体修饰的纳米银的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，羊抗鼠IgG抗体溶液的浓度为1-10mg/mL；羊抗鼠IgG抗体溶液与纳米银溶液的体积比为(0.1～10):10。

5.根据权利要求2所述的一种抗体修饰的纳米银的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，BSA缓冲溶液的浓度为1mg/mL，BSA缓冲溶液每次的加入体积为待加入的混合体系体积的0.1～5倍。

6.权利要求1所述的抗体修饰的纳米银在IgG检测中的应用。

7.一种用于检测IgG的试剂盒，其特征在于：包括磷酸盐缓冲液、羊抗鼠IgG、链霉亲和素、银增强试剂A和银增强试剂B、牛血清白蛋白溶液、抗体修饰的纳米银。

8.权利要求7所述的用于检测IgG的试剂盒在检测鼠IgG中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：包括以下步骤：

(1)配制溶液：

洗涤液：将20×PBS用二次水稀释20倍至1×PBS，加入0.05％体积比的Tween-20即得PBST洗涤液；

探针和样品稀释液：将0.1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中即得1mg/ml BSA；

封闭液：将1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中即得10mg/ml BSA封闭液；

目标物：用1mg/ml BSA配制不同浓度的IgG；

探针：用BSA溶液配制所需浓度的探针；

显色液：将银增强试剂A和银增强试剂B按体积比1：1的混合液；

(2)将目标物、阴性对照物、阳性对照物分别在醛基修饰的玻璃片上点样，37℃条件下固定2-4h；

(3)每孔加入10～50μL封闭液，在20-37℃条件下封闭1～3小时，用洗涤液荡洗5～15min，洗涤3～4次，吹干；

(4)每孔加入20～50μL纳米银-抗体探针，在20-37℃条件下反应10～60分钟，用洗涤液荡洗5～15min，洗涤3～4次，并用去离子水冲洗3～4次，吹干；

(5)每孔加入20～50μL显色液，避光反应5～20min，去离子水冲洗3～4遍，吹干；

(6)用CCD生物芯片扫描仪扫描，根据得到的灰度值信号做标准曲线，得到IgG的线性范围。