[发明专利]一种忘萱草鳞茎芽的组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种宿根花卉忘萱草组织培养技术，具体涉及一种忘萱草‘红宝石’鳞茎芽的组培方法。 

背景技术

黑龙江地理气候条件使黑龙江省园林绿化苗木种类单一，抗寒、抗逆品种缺乏，特别是能够应用于绿化的花卉品种少之又少，据哈尔滨园林处统计，园林绿化花卉在2013年的一年缺口量达一亿株左右，尤其是宿根花卉，各大苗圃几乎没有现苗，而萱草属于多年生宿根花卉，具有抗寒越冬能力，在城市极端逆境环境中能够正常生长。 

萱草不能用种子进行大量生产繁殖，只有靠分株繁殖，而一年只能分4～5株，分株繁殖生产技术是严重制约萱草生产的瓶颈，目前市场上供应只有黄花萱草，而忘萱草在花色、株型、抗寒性等方面均优于黄花萱草，因此对忘萱草简约化快繁技术进行研究具有广阔的市场前景；忘萱草(Hemerocallis fulva(L.)L.Var.disticha(Donn.)Baker)，为百合科多年生草本宿根花卉，叶狭长，花呈喇叭形，花茎短而适中，花色为深红，色彩华丽，具有观赏价值高、适应性强、栽培管理粗放等特点，能广泛用于城市绿化和园林景观建设。 

对忘萱草‘红宝石’这个品种的研究报道较少，目前还尚未有对忘萱草‘红宝石’鳞茎芽组培方法的报道，本组培快繁中心多年对忘萱草‘红宝石’快繁技术进行研究，卢宝伟等对忘萱草‘红宝石’花托为外植体进行组培快繁试验中，获得快繁组培苗；在安凤霞、卢宝伟等的研究中用红花萱草的地下块茎作为外植体获得组培试验苗；与目前组培技术相比，更需要开发出具有周期短，能大量快速繁殖的忘萱草‘红宝石’组培方法，来满足日趋增大的市场需求。 

发明内容

本发明的目的：提供一种忘萱草‘红宝石’的鳞茎芽组培快繁方法，该培养方法具有培养程序少、增殖系数高、周期短等诸多优点。 

本发明的技术方案：是一种忘萱草‘红宝石’鳞茎芽快速组培成苗的方法，其特征在于按照以下步骤进行： 

①外植体选择和处理：依据忘萱草‘红宝石’每年春季3-4月份具有分株繁殖特性，外植体选取鳞茎盘两侧具有分生能力的鳞茎芽，首先将鳞茎盘切割成0.4立方厘米带有鳞茎芽的外植体小块放入三角瓶中流水冲洗2-3小时，冲洗干净后用质量百分比浓度为70％酒精浸泡30秒进行杀菌，再用质量百分比浓度为0.2％的升汞溶液浸泡消毒18分钟，最后用无菌水震荡清洗5次。 

②丛生芽诱导和增殖：将无菌的带有鳞茎芽外植体小块放入丛生芽增殖诱导培养基中3-4天后会直接分化成芽，随着芽的生长会在芽基部分化出新的侧芽，每个鳞茎芽基芽8-12天后能分化出7-10个丛生侧芽，丛生芽诱导增殖培养基是MS+土豆泥20mg/L+6-苄基嘌呤1.5mg/L+激动素1.0mg/L。 

③丛生苗生根诱导：当丛生苗长到3-4厘米左右的时放入生根培养基中培养，生根培养基是1/4MS+土豆泥5mg/L+萘乙酸0.3mg/L，当诱导根3-4条时再进行炼苗，根生长极为健壮，组培苗长势极好，本过程组培苗移栽成活率达98％以上。 

上述丛生芽诱导增殖和丛生苗生根诱导的基础培养液为MS(Murashige and Skoog) 

上述培养基均添加3％(质量百分比)蔗糖和0.6％(质量百分比)卡拉胶，pH值5.8。将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中在110℃灭菌20min，取出冷却，放置2-3d即可使用。 

本发明获得的有益效果： 

与现有的忘萱草‘红宝石’其他组培方法相比，本发明创新点是所采用的外植体鳞茎芽，鳞茎芽是鳞茎盘两侧具有分生能力的芽点，其优点在于不仅诱导启动时间短，一般3-4天即可直接诱导启动出芽，诱导率达100％，而且增殖诱导率高，每个鳞茎芽基芽8-12天后能分化出7-10个丛生侧芽；本人曾用过花托作为外植体进行组织培养，但花托外植体诱导启动时间较长，需要15-20天，且诱导启动和增殖要分开进行，而该方法将诱导和增殖分化结合成一步进行，不仅节省诱导分化时间也简化了组培操作程序。 

丛生芽增殖诱导和丛生苗生根诱导中加入土豆泥目的是为组培苗提供营养物质，加速丛生芽快速生长，这样缩短组培快繁实施周期到45-50天左右，比忘萱草‘红宝石’花托为外植体的组培快繁周期(2个月)短10-15天，采用本发明实施方式可以进行大规模快速组培苗生产。 

附图说明

图1三年生开花的忘萱草‘红宝石’；图2采集春季3-4月份忘萱草‘红宝石’植物材料；图3切割带有鳞茎芽外植体小块；图4启动3-4天的鳞茎芽；图58-12天后分化增殖出的7-8个丛生芽；图6诱导苗发出3-4个侧根。