[发明专利]一种提高鸡骨骼肌成肌细胞分化能力的制剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高鸡骨骼肌成肌细胞分化能力的制剂及其应用，属于生物工程技术领域。

背景技术

肌肉组织广泛存在于动物体，是胚胎发育过程中最早形成的组织之一，是研究细胞命运决定、细胞分化、形态发生等基本生命现象的良好模型。然而目前为止，对肌肉发育及再生机制的阐述仅仅是冰山一角。尽管体内成肌模型的建立很好的模拟了肌肉的再生过程，但也给相关机制的研究增加了复杂性，因此建立高效、稳定的骨骼肌细胞体外培养体系将为进一步阐述骨骼肌发育、再生机制奠定基础。

肌肉形成是一个连续的生理过程。胚胎期，肌肉前体细胞——成肌细胞增殖、分化、融合为初级肌管并逐步成熟；出生后，肌管的数目虽然不再改变，但当肌肉组织受损时，静息的卫星细胞被激活，进而分裂、融合形成新的肌管，肌肉得以再生(Brian etal.,2008)。依靠现代细胞分离、培养技术，研究人员能够利用胚胎成肌细胞或成体卫星细胞体外培养获得初级肌管，但所得肌管类型随机性强，氧化代谢水平各异，通常仅在形态或功能的某些方面符合体内的成肌进程。这对于未来在医疗上通过细胞移植治疗肌病，如心肌梗死、缺血性心力衰竭、大面积肌肉损伤、杜兴肌营养不良症等造成了技术上的障碍。此外，畜牧业生产中，畜禽的体增重、肌肉含量和体脂含量对于不同育种目标的畜禽是均非常重要的考察指标。例如，肉禽要求有较快的体增重和较高的肌肉含量，以期获取较高经济效益；而种禽则相反，要求体重小，增重慢，以利于公禽的精液品质和母禽的产蛋性能；有些地方品种又要求控制一定的肌肉和体脂比例以保证其可口的风味。因此，对肌肉形成相关过程和机制的研究也将为畜禽育种上的应用提供理论参考。

肌肉组织并不是由单一类型的细胞构成，肌肉细胞和其它类型细胞之间的互作在整个成肌过程中发挥重要作用(Donoghue and Sanes,1994；Krauss et al.,2005)。无论是发育期还是成熟期的肌肉组织中都存在肌源成纤维细胞，它们位于肌肉细胞外的基质中，不仅为成肌提供了可以附着的骨架结构，还在很大程度上负责分泌细胞外基质和生长因子(Idea etal.,2009)。现有的成肌培养体系大多没有考虑到体内成肌微环境的作用，因而建立一种接近体内成肌模式的体外培养体系对于肌肉发育和再生机制的研究及医疗和畜牧生产领域的应用均具有积极意义。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种提高鸡骨骼肌成肌细胞分化能力的制剂，所采取技术方案如下：

本发明的一个目的是提供一种提高鸡骨骼肌成肌细胞分化能力的制剂，该制剂是由肌源成纤维细胞提取物、丙酮酸盐和钙盐组成。

所述肌源成纤维细胞提取物是鸡肌源成纤维细胞经超声波裂解后，分离得到小于10KDa的蛋白液经真空干燥获得的。

所述制剂用于培养鸡骨骼肌成肌细胞，提高鸡骨骼肌成肌细胞的分化能力。

所述丙酮酸盐可以为丙酮酸钙、丙酮酸钠、丙酮酸钾；所述钙盐可以为丙酮酸钙、氯化钙、硫酸钙；丙酮酸盐和钙盐可同时为丙酮酸钙。

优选地，丙酮酸盐和钙盐同时为丙酮酸钙。

所述肌源成纤维细胞提取物与丙酮酸钙单独包装。

本发明的另一个目的是提供一种利用所述制剂培养鸡骨骼肌成肌细胞的方法，该方法是将肌源成纤维细胞与丙酮酸钙混合后，添加到成肌分化培养基中使用。

所述肌源成纤维细胞提取物与丙酮酸钙混合，肌源成纤维细胞提取物与丙酮酸钙的质量比为10-120:1。

所述添加到成肌分化培养基中使用，肌源成纤维提取物的终浓度为600-2400mg/L，丙酮酸钙的终浓度为5-80mg/L。

优选地，肌源成纤维提取物的终浓度为2400mg/L，丙酮酸钙的终浓度为20mg/L。

所述鸡骨骼肌成肌细胞分化培养条件优选培养温度为39℃，CO₂浓度为5％，周期为8—10天，其间每隔2天换液一次。

所述成肌分化培养基优选含有2％马血清、2mML-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素的高糖DMEM培养基。

本发明有益效果：