[发明专利]一种有抑制酪氨酸酶活性的漆树多酚提取物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种有抑制酪氨酸酶活性的漆树多酚提取物及其制备方法，属于天然药物、化妆品技术领域。

背景技术

漆树（Rhus verniciflua stokes），为漆树科（Anacardiaceae）漆树属（(Toxicodendron）的一种落叶乔木。 漆树是我国重要的特用经济林，生漆是天然树脂涂料，素有“涂料之王”的美誉。它还是一种优良的药用木材，漆树的叶、花、根、皮、果实、干漆和木心都可入药，有止咳、消癖、通经、杀虫、消肿等功效。漆树木质部位的多酚化合物是继生漆漆酚、漆多糖后的主要活性物，大量的研究表明其具有优良的抗氧化性、抗肿瘤、抑菌和免疫调节等作用。

据调研了解，我国化妆品市场以每年15%左右的速度增长，2011年已突破2000亿大关，我国目前是全球第三大化妆品市场。根据市场研究公司 Euromonitor的数据显示，在我国的皮肤护理品市场中，美白产品占据了71%的份额。目前市场上销售的许多美白、祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶达到美白作用，从而促使了与酪氨酸酶抑制剂相关研究的蓬勃发展。由于酪氨酸酶抑制剂在化妆品中的广泛使用，研究可以长期使用、安全、有效的药物将成为人们要考虑的主要问题。世界各国植物资源丰富，天然资源因其药效温和、不良反应小而被广泛认同，天然酪氨酸酶抑制剂的开发将成为化妆品领域一个备受瞩目的课题。

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1, Tyrosinase)广泛分布于微生物、动植物以及人体中。酪氨酸酶具有独特的双重催化功能：催化 L-酪氨酸羟基化转变为 L-多巴和氧化 L-多巴形成多巴醌，是生物体内黑色素合成的关键酶，与人的衰老、昆虫的伤口愈合与发育、果蔬的褐变等有密切关系。其活性异常过量表达可导致人体的色素沉着性疾病(如雀斑、黄褐斑、老年斑等)。

我国是漆树的原产地，主要集中在陕西、四川、重庆、湖北、贵州、甘肃和云南七个省，在镇雄、大方、毕节、赫章、北川、恩施等 60 多个县建立了漆树产业化种植基地，种植面积达100万hm2，栽种漆树达150,000 万株。但是目前漆树的产业主要集中在天然生漆涂料的生产及开发，在漆籽的利用方面也比较薄弱，另外在漆树生长、利用过程中，大量的枝桠茎材未得到利用，为了扩大漆树产业的规模化，延伸漆树资源的产业链，因此开展漆树多酚的提取制备和生物活性研究，对于漆树资源的开发利用具有指导意义。已知的国内外文献对漆树多酚的的研究主要集中在抗肿瘤、抑菌和抗氧化等方法，对漆树多酚抑制酪氨酸酶活性的研究与开发尚属空白。

发明内容

为实现上述目的，发明了一种有抑制酪氨酸酶活性的漆树多酚提取物及其制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

（1）提取

将漆树木材干燥、粉碎，去渣，按质量体积比为1:5~1:30(g:mL)，加入质量分数为50~95%的乙醇水溶液，常温或加热回流提取、或减压回流提取、或超声波辅助提取或微波辅助提取2~3次，每次10min~10h，过滤，滤液合并，于40~60℃下减压蒸发除去溶剂，再经真空干燥或冷冻干燥，得到粗提物；

（2）萃取

粗提物按质量比1:5~1:10(g:mL)加入蒸馏水，搅拌溶解，加入石油醚萃取3~5次，分离，在40~60℃下减压蒸发除去溶剂，得到石油醚萃取物；水层继续用乙酸乙酯萃取3~5次，分离，在40~60℃下减压蒸发除去溶剂，干燥得到乙酸乙酯相;

（3）大孔树脂纯化

将乙酸乙酯相按质量比1:5~1:10(g:mL)加入质量分数为10%的乙醇水溶液，超声震荡溶解，加入大孔吸附树脂，先用质量分数为10~20%的乙醇水溶液进行洗脱，洗至无色，这部分收集液不用，以除去极性大的杂质，再用质量分数为30~60%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱剂用量为3-6倍住体积，收集洗脱液，于40~60℃下减压蒸发除去溶剂，干燥，即得漆树多酚提取物；

（4）提取物多酚含量和化学成分分析

将漆树多酚提取物进行化学成分分析，总多酚含量为50~60%，经HPLC分析，漆树多酚提取物的主要化学成分为漆黄素含量为0.4~0.7%，黄颜木素含量为5~10%，硫黄菊素含量为0.5~1%和紫铆花素含量为0.2~0.5%，漆酚的含量<5PPm;

（5）提取物抑制酪氨酸酶活性

将漆树多酚提取物进行抑制酪氨酸酶活性研究，当浓度范围在400~600ug/mL，抑制率为60~80%，其IC50值为308μg/mL。通过对抑制酪氨酸酶活性的机理研究，其抑制类型为混合型。