[发明专利]一种蜂蜜中雷公藤次碱的检测方法

权利要求书

1.一种蜂蜜中雷公藤次碱的检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1）标准溶液的配制

标准储备液：称取雷公藤次碱标准品10 mg，精确至0.1 mg，置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀配制成100 mg/L的标准储备液；

标准中间液：准确移取１mL标准储备液置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配成1.0mg/L的混合标准中间液；

标准工作液：根据需要移取适量混合标准中间液，用甲醇－水，体积比为1:1，稀释成0.01 ng/mL、0.02 ng/mL、0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL的标准工作溶液；

各种标准溶液避光保存于４℃冰箱中；

2）试样制备

对未结晶的蜂蜜将其用力搅拌均匀，对有结晶析出的蜂蜜可将样品瓶盖塞紧后，置于不超过60℃的水浴中温热，待样品全部融化后搅拌，迅速冷却至室温，在融化时必须防止水分挥发；

3）提取

称取试样2.0 g，精确至0.01 g，于15 mL具盖离心管中，加入10 mL水，采用震荡、超声、加热或漩涡方式使其溶解，待净化；

4）净化

移取试样提取液于固相净化小柱中，使用前依次用5 mL甲醇，5 mL水活化，弃去流出液，然后用5 mL体积比为1:1的甲醇/水溶液淋洗小柱，弃去流出液，最后用5 mL乙腈洗脱，收集洗脱液于带刻度离心管中，氮吹浓缩至近干，最后用体积比为1:1的甲醇/水溶液定容至2 mL，混匀后经0.22μm有机相滤膜过滤后用于上机分析；

5）色谱条件

色谱柱：Hypersil GOLD C18柱，50mm×2.1mm,1.9um；柱温：35℃；进样量：2uL；流速：0.25 mL/min；流动相：Ａ 为水溶液，Ｂ为含0.15%甲酸的甲醇溶液；梯度洗脱程序：0～2.0min,70%A；2.0～5.0 min,70%A～5%A；5.0～10.0 min,5%Ａ；10.1～14.0min，70%A；

6）质谱条件

扫描方式：正模式扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：+3500 V；鞘气：30 arb；辅助气：10 arb；毛细管温度：350℃；蒸发温度：300℃；碰撞气：氩气；SRM监测离子对：868.468/206.022、868.468/178.028；S-Lens电压：155 V；碰撞电压：41V:54V;保留时间为6.17 min。