[发明专利]重组人成纤维细胞生长因子-20的基因克隆、表达及应用

权利要求书

1.一种源至pET3a-c或pET28a(+)的原核表达载体，其含有编码FGF-20的重组DNA，其中所述编码FGF-20的核苷酸序列见核苷酸或氨基酸序列表所示。

2.含有权利要求1所述表达载体的大肠杆菌BL21(DE3)plysS或Transetta(DE3)。

3.一种生产FGF-20的方法，通过培养权利要求2所述的宿主细胞，并加诱导剂诱导表达FGF-20，并进一步通过分离纯化获得高纯度的FGF-20蛋白。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)通过改良种子培养基对权利要求2所述的工程菌进行活化和扩增，接种至发酵罐中通过优化控制参数及采用流加补料的方式进行规模化的高密度培养，优化诱导时机和诱导时间高效表达外源蛋白FGF-20；

(2)优化裂解溶液并通过高压均质机进行菌体破碎，低温高速离心弃上清收沉淀；优化包涵体清洗、变性及复性方法与步骤，并通过中空纤维超滤装置进行初步分离纯化；

(3)通过柱层析进行精细分离纯化，具体包括：阳离子交换柱层析(SP Sepharose Fast Flow或CM Sepharose Fast Flow)、肝素亲和柱层析(Heparin Sepharose CL-6B)或金属离子螯合柱层析(Chelating Sepharose Fast Flow)及其组合。

5.根据专利权要求1～4所述制备的FGF-20，其特征是，可应用于皮肤或黏膜损伤的组织修复、治疗帕金森或阿尔次海墨症等退行性神经系统疾病。还可制备成不同制剂，应用于生物美容及烧烫伤、难愈性溃疡的治疗。