[发明专利]一种可用于筛选生猪肠道高粘附能力微生态制剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及猪粪便中强粘附细菌的筛选及其生长特性的研究，与猪养殖产业关系密切，可用于养殖业饲料的研制和动物疾病的治疗。 

背景技术

随着国内肉类产品市场供应的相对充足，肉猪的快速生长与肉猪品质矛盾凸显。有效提高产肉效率、改善猪肉品质是一项亟待解决的问题。而益生菌则是一类安全、无毒副作用的健康细菌，能抵抗外来病原菌的侵入，提高肉猪的免疫力和营养利用率，用以饲料发酵可以替代抗生素的使用和催化肉猪生长的药物的使用，生产安全优质的肉类产品。 

益生菌发酵饲料是指在人工控制条件下，有益微生物通过自身的代谢活动将植物性、动物性和矿物质中的抗营养因子分解、合成，产生更能被畜禽采食、消化、吸收和无毒害作用的单一饲料。 

在家畜养殖过程中，动物疾病的发生不可避免的导致抗生素的大量使用，使得药物残留极为严重，严重影响了肉类的品质、风味和食用安全性。采用动物肠道内益生菌共同研制的饲料能针对不同种类动物生产专一饲料，有效针对不同动物的不同生理状态采用不同的特定饲料。细菌的粘附性是益生菌发酵饲料的一个重要指标。筛选粘附能力强的益生菌参与发酵能有效的使细菌定植于动物肠道中，抵御外来病原菌的侵入，同时定植后的细菌能参与食物分解，提高饲料的利用率，增加肉猪的产肉率。 

本发明在猪粪便中强粘附细菌的筛选及其生长特性的研究中，提供了一套从猪粪便中筛选强粘附细菌的方法，并测定了细菌的粘附性、胆盐耐受、酸碱耐受和抗定植能力等生长特性。 

发明内容

本发明的目的在于针对猪粪便中强粘附细菌的的特性从而筛选具有高粘附能力的益生菌。 

本发明所述制备方法包括下列步骤： 

（1）样品的收集和保存：收集健康猪盲肠中的粪便和肠壁粘膜层物质，转人厌氧环境，加入甘油，其重量为粪便和甘油总重量的10％，旋涡振荡器混匀，-8O ℃保存；

（2）恒化器的组装和使用：将储料罐，发酵罐，废液罐，橡胶塞，硅胶管，装NaOH的玻璃瓶及通气过滤器按顺序连接起来，置于工作台上，连接混合气体，蠕动泵，pH调节器，磁力搅拌器，废气排除装置；

（3）恒化器内培养基的制备：按加入成分占终产物质量百分比加入如下成分：5‰可溶性淀粉，3‰牛乳酪蛋白，3‰蛋白胨，0.6‰果胶，0.6‰木聚糖，0.6‰阿拉伯半乳聚糖，0.6‰支链淀粉，0.4‰半胱氨酸, 0.01‰血红素，0.25‰胆固醇，0.25‰鹅脱氧胆酸，0.25‰胆酸，2‰磷酸二氢钾，10‰磷酸氢二钾，4.5‰氯化钠，0.5‰七水硫酸镁，0.45‰二水氯化钙，培养基经高压灭菌后用蠕动泵泵入储料罐内；

（4）待恒化器稳定后，在培养基中接种步骤（1）中得到的-8O ℃保存的猪粪便样品或肠粘膜层，其重量为培养基和猪粪便或培养基和肠粘膜层总重量的10%，连续培养8-16天后得到的的培养物即为健康人体肠道微生态系统；

（5）刮取恒化器瓶壁上的物质，利用活菌技术方法分离微生物并鉴定；鉴定出的微生物利用细胞粘附试验和益生菌评价指标评价其益生效果。

本发明的有益效果：本发明直接以对恒化器瓶壁粘附能力作为筛细指标，针对性强，由于粘附能力是益生菌发挥作用的关键性指标，因此本发明可用于畜牧和人类微生态潜在菌株的筛选，该方法简单、快捷。 

  

附图说明

图1肠道微生物粘附性能力测定；图2-1肠道微生物酸碱耐受性2h； 

图2-2肠道微生物酸碱耐受性4h；图3-1肠道微生物胆盐耐受性24h；

图3-2肠道微生物胆盐耐受性4h。

具体实施方式

实施例1： 

猪粪便中强粘附细菌的筛选及鉴定：

1、样品的收集和保存：收集健康猪盲肠中的粪便和肠壁粘膜层物质，转人厌氧环境，加入甘油，其重量为粪便和甘油总重量的10％，旋涡振荡器混匀，-8O ℃保存；

2、恒化器的组装和使用：将储料罐，发酵罐，废液罐，橡胶塞，硅胶管，装NaOH的玻璃瓶及通气过滤器按顺序连接起来，置于工作台上，连接混合气体，蠕动泵，pH调节器，磁力搅拌器，废气排除装置；