[发明专利]一种改进的蛋白质测定方法

权利要求书

1.一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）称取待测样品0.5000g放入消化管中，向消化管中加入4.5g硫酸钾和0.5g硫酸铜，然后量取10～12mL浓硫酸缓缓加入到消化管中，混合均匀后，在消化管瓶口放一小漏斗，放入消化炉中消化；

（2）当消化管中内容物的颜色逐渐转化成透明的淡绿色时，取下消化管冷却后，向消化管中加入10mL 30％的过氧化氢溶液将消化管管壁上粘有的碳化粒冲到消化管底部；

（3）将消化管再次放入消化炉中继续消化至呈透明为止，然后取下消化管，稍冷后将消化液小心移入100mL容量瓶中；

（4）蒸馏

吸取25mL消化液于定氮蒸馏器中，在其冷凝器的下端放置一个盛有5OmL硼酸溶液和3滴甲基红-溟甲酚绿混合指示剂的25OmL锥形瓶，使冷凝器下端的玻璃管在锥形瓶内的液面以下；将10mL质量分数为40%的氢氧化钠溶液慢慢地加入蒸馏瓶中，迅速将塞子塞好，然后通入蒸汽进行蒸馏，蒸至液面达15OmL时，提出冷凝器下端的玻璃管，用蒸馏水冲洗冷凝管下端，将洗液一并聚集于硼酸溶液中，让玻璃管靠在锥形瓶的瓶壁，出液口在200mL刻度线以上，继续蒸馏，蒸至液位达200mL；

（5）滴定

用0.1mol/L的硫酸标准溶液滴定至溶液出现酒红色为止，记录所用硫酸标准溶液的体积；

（6）计算结果

X=(V一V0)×c(H^＋) ×2×0.014×F×100/m

式中:X—蛋白质含量，g/100g；

V—滴定时消耗硫酸标准溶液的体积，mL；

Vo—空白试验消耗硫酸标准溶液的体积，mL；

c(H^＋)—硫酸标准溶液中H十的浓度，mol/L；

m—样品的质量，g；

0.014—氮原子的摩尔质量，kg/mol；

F—氮换算为蛋白质的系数，乳粉为6.38 ，纯谷物类(配方)食品为5.90，含乳婴幼儿谷物(配方)食品为6.25。

2.根据权利要求1所述的一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于：所述步骤（1）中浓硫酸的浓度为1.84g/mL。

3.根据权利要求2所述的一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于：所述步骤（3）中消化时间为0.5～1.0h。

4.根据权利要求3所述的一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于：所述步骤（4）中甲基红-溟甲酚绿混合指示剂制备步骤为：用体积分数为95%的乙醇，将澳甲酚绿及甲基红分别配成lg/L的乙醇溶液，使用时按澳甲酚绿：甲基红为5：1的比例混合。

5.根据权利要求4所述的一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于：所述步骤（4）中硼酸溶液浓度为30g/L。