[发明专利]一种发酵黄芪的制备方法及其总皂苷的提取方法

权利要求书

1.一种发酵黄芪的制备方法，其特征在于：步骤如下：将洁净的黄芪生药饮片粉碎后，发酵黄芪，发酵菌株非解乳糖链球菌CGMCC No.4227的菌液浓度为2×10⁶～2×10⁸个/mL，接菌量为4%～5%（占发酵总体积），黄芪用量为8%（黄芪质量：发酵液体积，g:mL），温度38℃～39℃，转速200r/min，pH值5.5～6.5，溶氧量5%～10%，中和剂为6mol/L的NaOH，发酵时间44h～52h，发酵结束后，冻干发酵黄芪液得发酵黄芪产品；优选地，发酵菌株CGMCC No.4227的菌液浓度为2×10⁸个/mL，接菌量为5%（占发酵总体积），黄芪用量为8%（黄芪质量：发酵液体积，g:mL），温度39℃，转速200r/min，pH值6.4，溶氧量10%，中和剂为6mol/L的NaOH，发酵时间48h；优选地，所述发酵黄芪过程中使用的液体培养基由以下重量份数的成分制备完成：乳清粉：24～27份；蛋白胨：2.2～2.4份；葡萄糖：0.5～0.7份；酵母粉：1.4～1.7份；硫酸镁：0.03～0.05份；柠檬酸三铵：0.30～0.50g；硫酸氢二钾：0.30～0.50g；乙酸钠：0.90～1.10g；黄芪粉：80～100份；水：900～1100份；更优选地，所述发酵黄芪过程中使用的液体培养基由以下重量份数的成分制备完成：乳清粉：25.79份；蛋白胨：2.28份；葡萄糖：0.60份；酵母粉：1.56份；硫酸镁：0.04份；柠檬酸三铵：0.40份；硫酸氢二钾：0.40份；乙酸钠：1.00份；黄芪粉：80份；水：1000份。

2.权利要求1所述的发酵黄芪作为饲料添加剂的应用。

3.一种饲料添加剂，其特征在于：所述饲料添加剂的有效成分为权利要求1所述的发酵黄芪。

4.一种发酵黄芪总皂苷的提取方法，其特征在于：步骤如下：

（1）将权利要求1所述的发酵黄芪用80%～90%乙醇温浸提取，优选用85%乙醇温浸提取，得到醇提发酵黄芪流浸膏；优选地，所述流浸膏中1g流浸膏含0.9～1.1g生药黄芪；

（2）将步骤（1）得到的醇提发酵黄芪流浸膏用水饱和正丁醇萃取，得提取液；

（3）将提取液上样于大孔吸附树脂柱吸附，洗脱，收集洗脱液，将洗脱液进行后处理，得到纯化后的发酵黄芪总皂苷。

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于：所述温浸提取是将发酵黄芪用80%～90%乙醇室温下密闭浸泡6h～10h，83℃～86℃温浸1h～2h，过滤，滤渣再重复提取1次；优选地，所述温浸提取是将发酵黄芪用85%乙醇室温下密闭浸泡8h，85℃温浸1h，过滤，滤渣再重复提取1次。

6.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于：所述温浸提取时每1g发酵黄芪用20ml 85%乙醇温浸提取。

7.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于：步骤（2）中用水饱和正丁醇萃取时，沿同一方向匀速轻微振摇，待稍静止后，再反方向轻微振摇。

8.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于：步骤（3）中所述大孔吸附树脂为AB-8或D101；优选为AB-8。

9.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于：步骤（3）中所述洗脱是先用30%乙醇洗脱，弃洗脱液；再用70%～90%乙醇洗脱，收集洗脱液；优选地，所述洗脱是先用30%乙醇洗脱，弃洗脱液；再用85%乙醇洗脱，收集洗脱液。

10.根据权利要求4-9任一所述的提取方法，其特征在于：提取后洗脱液经浓缩干燥后，发酵黄芪总皂苷含量达78.52%～88.39%。