[发明专利]一种能诱导猪体较早产生干扰素和中和抗体且具有广谱免疫原性的PRRSV减毒株及其疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合症病毒减毒株及其疫苗，特别涉及一种能诱导猪体较早产生干扰素和中和抗体且具有广谱免疫原性的猪繁殖与呼吸综合症病毒减毒株以及由该减毒株或其传代株制备得到的疫苗。本发明属于医药生物技术领域。 

背景技术

猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)，属于套式病毒目的动脉炎病毒科动脉炎病毒属的成员，是引起猪繁殖与呼吸综合症的病原，可致妊娠母猪晚期流产、早产和产死胎，仔猪与育肥猪呼吸道疾病。 

猪繁殖与呼吸综合症病毒的基因组为单链正向RNA，其基因组长度为15kb左右，具有5’端帽子和3’端Poly(A)结构，已经发现有9个开放阅读框(ORF1-9)。ORFs-1编码负责病毒复制转录的酶，ORFs2-4分别编码病毒粒子相关蛋白GP2、GP2b、GP3以及GP4，ORFs5-7分别编码主要结构蛋白：糖基化囊膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)，囊膜蛋白(E)又称GP5蛋白。目前PRRSV有2个主要基因型，欧洲型(1型)PRRSV和美洲型(2型)PRRSV，基因同源性55-70％，基因1型PRRSV病毒至少有3个遗传谱系，基因2型PRRSV病毒至少有9个不同遗传谱系。 

猪繁殖与呼吸综合症病毒能够引起母猪严重的生殖疾病，如死胎、畸形仔猪和二次感染的呼吸道疾病，在美国每年造成约5亿美元的损失，在中国每年造成约200亿人民币的损失。目前已有减毒活疫苗和灭活疫苗用于猪猪繁殖与呼吸综合症的预防和控制。 

分子流行病学调研发现国内目前流行2和1基因型多种遗传谱系的猪高致病性繁殖与呼吸综合病毒。基因型、抗原性的多样、不断变异新变种的出现流行，且有疫苗株和野毒株重配、疫苗免疫猪体分离到变异株、以及减毒活疫苗免疫保护低下的现象。 

猪繁殖与呼吸综合症病毒逃逸机体免疫和病毒多样性导致了目前国内外上市的减毒活疫苗和灭活疫苗的效果不甚理想，特别对异源基因型毒株感染免疫效果不佳。采用逆向分子遗传学研制的试验性的猪繁殖与呼吸综合症病毒疫苗、减毒活疫苗、重组载体表达PRRSV蛋白疫苗、DNA疫苗、植物生产的亚单位疫苗都在不同试验动物上尝试，但由于病毒本身基因和抗原的多样性、以及对其致病性和免疫性的了解甚少成为这些试验性疫苗发展的主要挑战。随着抗PRRSV免疫和PRRSV逆向分子遗传学的研究深入，合理设计研发具有广谱免疫原性的猪繁殖与呼吸综合症病毒疫苗成为疫苗研究的主要方向。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种猪繁殖与呼吸综合症病毒的减毒株，该毒株可较早激活猪体干扰素免疫防御系统，使得猪体较早产生I类干扰素，同时较早产生中和抗体和细胞免疫，同时激发对同源型和异源型的猪繁殖与呼吸综合症病毒的保护性免疫，以此病毒作为抗原注射机体，和现行的减毒活疫苗相比较，具有更安全、更稳定、免疫保护水平高、免疫谱广、免疫持久等优点。 

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段： 

猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒株(HP-PRRSV-LZ)的分离：从我国河北省保定暴发猪高热综合症某猪场的病猪，将所采集的病料研磨、离心、过滤、取滤液冻存待用。用原代猪肺泡巨噬细胞扩增毒株传4代后，用PRRSV的N、GP5引物进行RT-PCR扩增；用PRRSVCH-1a株的N、GP5蛋白特异性单抗通过间接免疫荧光方法进行鉴定，试验证明该分离毒株为PRRS病毒，命名为HP-PRRSV–LZ-F4株；通过对HP-PRRSV–LZ-F4株的毒力的测定发现该株病毒对仔猪具有较强的致死性，PCR扩增结果为阳性。HP-PRRSV–LZ-F4株与PRRSV N、GP5蛋白特异性单克隆抗体呈阳性反应，而与猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪乙脑病毒、猪戊肝病毒、猪胃肠炎病毒以及猪流行性腹泻病毒的特异性单抗无交叉反应，采用RT-PCR技术对分离的HP-PRRSV–LZ-F4株的ORF7和ORF5基因进行进行了扩增，分别扩增出2个目的基因片段，在此基础上对分离到的HP-PRRSV–LZ-F4株做了PRRSVNsp2和GP5的序列进行分析证明HP-PRRSV–LZ-F4株属于美洲型(基因2型)，与已分离鉴定VR-2332具有较高的同源性。