[发明专利]拟穴青蟹抗菌肽SpHyastatin的制备方法与应用

权利要求书

1.拟穴青蟹抗菌肽SpHyastatin的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)拟穴青蟹抗菌肽SpHyastatin表达载体的构建：分别PCR扩增拟穴青蟹抗菌肽scygonadin基因和SpHyastatin基因，重叠PCR法获得联合多肽scygonadin/SpHyastatin的目的基因片段，将该片段插入pPIC9K载体中，进而得到pPIC9K-scygonadin/SpHyastatin重组表达载体；所述拟穴青蟹抗菌肽scygonadin基因的Genbank登录号为AY864802，拟穴青蟹抗菌肽SpHyastatin基因的Genbank登录号为JX228177；

所述联合多肽scygonadin/SpHyastatin的基因序列为：

所述联合多肽scygonadin/SpHyastatin的氨基酸序列为：

所述pPIC9K-scygonadin/SpHyastatin重组表达载体用于表达序列为SEQ ID No.1的拟穴青蟹抗菌肽scygonadin/SpHyastatin融合序列；

2)将步骤1)所得到的pPIC9K-scygonadin/SpHyastatin重组表达载体倒入宿主细胞，并将宿主细胞进行诱导表达，获得表达产物；

3)分离纯化步骤2)所得的表达产物，获得纯化产物融合蛋白scygonadin/SpHyastatin；

所述分离纯化的方法为：先将表达产物进行离心，收集发酵上清液，透析后，再进行亲和层析；

4)将步骤3)所得的纯化产物融合蛋白scygonadin/SpHyastatin进行肠激酶酶切反应，得酶切反应产物；

5)分离纯化步骤4)所得的酶切反应产物，获得重组蛋白，即拟穴青蟹抗菌肽SpHyastatin。