[发明专利]乙氧酰胺苯甲酯分子印迹固相萃取小柱的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体是一种乙氧酰胺苯甲酯分子印迹固相萃取小柱的制备方法及其在动物性食品中乙氧酰胺苯甲酯残留分析时样品前处理方面的应用。

背景技术

乙氧酰胺苯甲酯（Ethopabate，ETP）是氨丙啉等抗球虫药的增效剂，对鸡巨型、布氏艾美耳球虫以及其他小肠球虫具有较强的作用，多配成复方制剂，广泛用于临床，其抗球虫作用及机理与磺胺药和抗菌增效剂相同。2010版《中国兽药典》（第一部）已收载其原料及制剂，规定其制剂的休药期为7d。我国农业部文件《动物性食品中兽药最高残留限量》(农牧发[2000]235号)规定：ETP在禽的肝脏和肾脏中的最高残留限量为1500μg/kg，肌肉中的最高残留限量为500μg/kg。

由于ETP在动物性食品中的残留对人类健康和环境生态具有潜在的危害，建立和完善残留监测计划，定期对其残留进行监控，是控制其残留的有效途径。目前，基于各类生物性抗体的免疫分析方法需要制备结合抗原和有特异性识别作用的抗体，抗体制备过程较为复杂，同时分析过程中的稳定性和精密度都较低。ETP的仪器检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法和高效液相色谱-质谱联用法等。其中，薄层色谱法操作简单，便于掌握且定性准确，但该方法在定量测定时，准确度和灵敏度都较低，因此，常常作为一种定性测定方法来使用。单纯的色谱法检出限较高，不能满足痕量兽药残留和出口贸易检测的实际需要，且在分析之前常需要进行样品的净化和富集。色谱-质谱联用法的检测灵敏度虽然很高，但价格相对昂贵，检测成本较高。同时，许多动物性食品的基质较为复杂，干扰物质较多，前处理步骤比较繁琐。因此，亟需开发选择性强和效果好的样品前处理方法。

固相萃取（Solid Phase Extraction，SPE）是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和富集目标化合物的目的。固相萃取作为样品前处理技术，在实验室中得到了越来越广泛的应用。SPE技术自上世纪70年代后期问世以来，发展迅速，广泛应用于环境、制药、临床医学和食品等领域。与液液萃取相比，SPE具有回收率高、富集倍数高、有机溶剂消耗量低、操作简便快速和成本低等优点，易于实现自动化并可与其它分析仪器联用。采用该方法进行样品的前处理主要依赖于分析物与填料表面活性基团的相互作用，样品净化的效率和效果主要取决于填料的选择。传统的填料主要包括硅藻土、氧化铝、C8和C18硅烷等，这些填料的选择性较差，在对目标化合物进行分离和富集的同时，大量的样品基质及干扰物也会被富集，最终导致样品洗脱液中出现含量不等的杂质和样品基质，从而干扰目标化合物分离和分析的效果。

分子印迹技术作为一种能够获得在空间和结合位点上与某种分子完全匹配的聚合物制备技术，它具有构效的预定性、识别的特异性和广泛的实用性。基于该技术所制备的分子印迹聚合物（Molecular Imprinting Polymers，MIPs）可以特异性地识别目标化合物，而且制备方法简单，稳定性好，能够适用于多种环境条件，使用寿命长，可经再生后多次重复使用，成本低廉。因此，将MIPs用于待测物质的提取和检测具有较为明显的优势。

将分子印迹技术与SPE相结合，综合二者的优点，开发基于MIPs的SPE方法，将简化样品的前处理过程，减少检测过程中的干扰，提高样品前处理和分析方法的特异性。由MIPs装填的分子印迹固相萃取柱用于复杂基质中目标化学物的分离和富集可提高回收率和分离效果，并且具有很好的重现性，样品基质和pH值的变化对其吸附作用也无明显影响，该方法在化学物的残留分析中具有广阔的发展前景。

发明内容

本发明的目的是克服现有固相萃取方法的不足，采用悬浮聚合法制备ETP的MIPs微球，用作固相萃取的萃取介质，用于动物性食品样品中ETP的分离、富集和痕量检测。该固相萃取柱具有识别性专一、吸附量高、制备过程简单、成本低廉、反应条件易于实现等优点。

为了实现上述技术目的，本发明所采用的技术方案为：

一种ETP分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其步骤如下：

1）将模板分子ETP溶解于致孔剂中，加入功能单体，超声5mim，混匀，封口，4℃冰箱预聚合24h，得到预聚合体系；