[发明专利]一种合金负载分子筛电化学免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种合金负载分子筛电化学免疫传感器的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；取6 μL、0.5 ~ 2 mg/mL的哌嗪修饰的氨基化石墨烯的壳聚糖溶液滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；滴加3 μL、质量分数为1.0~2.5%的戊二醛溶液连接抗体和哌嗪修饰的氨基化石墨烯；

（2）在步骤（1）修饰的工作电极表面滴加6 μL、5~10 μg/mL的肿瘤标志物一抗，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

（3）在步骤（2）修饰的工作电极表面滴加6 μL、质量分数为1~2%的BSA溶液，封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

（4）在步骤（3）修饰的工作电极表面滴加6 μL、0.001~20 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中干燥；

（5）在步骤（4）修饰的工作电极表面滴加6 μL SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一种合金负载分子筛电化学免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种合金负载分子筛电化学免疫传感器的制备方法，所述SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）哌嗪修饰的氨基化石墨烯的壳聚糖溶液的制备

将0.5 ~ 2.0 mg哌嗪修饰的氨基化石墨烯加入到1 mL、0.1%的壳聚糖溶液中，超声分散10 ~ 20 min，将溶液保存在4 ℃下备用；

所述0.1%的壳聚糖溶液，是将1 g的壳聚糖溶于10mL、0.02mol/L的稀盐酸溶液中；

（2）SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物的制备

1）氨基化分子筛的制备

称取0.05~1.5 g SAPO-34于三口烧瓶中，加入0.1~3 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷和10 mL的无水乙醇，将混合物加热到70 ℃并保持1.0~2.0 h，然后冷却到室温，混合物经7000 rpm下离心分离5 min，制得氨基化的分子筛NH₂-SAPO-34，用水洗涤并离心分离三次，最后将氨基化的分子筛在35~45℃下真空干燥；

2）SAPO-34-Pd/Co的制备

在氮气保护和冰浴冷却下，将3~6 mL、0.2 mol/L的硝酸钴，2.5 mL、64 mmol/L的柠檬酸钠，20 ~40 mg NH₂-SAPO-34和25 mL超纯水混合超声20 min；

将5 mL、1.6 mol/L的硼氢化钠溶液以20 mL/h的速率加到上述混合液中并强力搅拌，制得Co纳米粒子溶液；

将10 mL、30~60 mmol/L四氯钯酸钠Na₂PdCl₄和10 mL、0.16 mol/L的NaBH₄溶液同时以20 mL/h的速率加到Co纳米粒子溶液中，混合物再搅拌1 h，然后分离洗涤，并在35 ℃下真空干燥，制得SAPO-34-Pd/Co；

3）SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液的制备 

将1~3 mg的SAPO-34-Pd/Co分散到1 mL超纯水中，加入100 μL、80~120 μg/mL的二抗Ab₂和900 μL、40~60 mmol/L的pH 7.4磷酸盐缓冲溶液，4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h，在4 ℃下、6000 rpm转速下离心15 min，得到下层沉淀；再加入1 mL、50 mmol/L 的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液离心洗涤1次，得下层沉淀；最后加入1 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液，制得SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液，4 ℃下保存备用。