[发明专利]一种抗I2抗体层析试纸条及其用途

权利要求书

1.一种抗I2抗体免疫层析试纸条，包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带T线(4)和质控带C线(5)，所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3)，所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6)，所述结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1)，所述检测带T线(4)和质控带C线(5)设置在分析膜(3)上，其特征在于，I2抗原蛋白结合在结合垫(2)上或包被在检测带T线(4)上。

2.根据权利要求1所述的I2抗体检测试纸条，其特征在于，所述的结合垫为1层(图1)或上(2a)、下(2b)两层与分析膜错落搭接(图2)。

3.一种抗I2抗体免疫层析试纸条的制备方法，包括如下步骤：

步骤1.I2抗原蛋白的制备

步骤2.结合垫(2)制备

(1)胶体金标记物的制备：用纳米金溶液标记I2抗原蛋白、抗人IgA抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G)，以及其他检测带T线或与质控带C线能形成免疫复合物的蛋白。

(2)胶乳标记物的制备：用带活性基团的胶乳微球标记I2抗原蛋白、抗人IgA抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G)，以及其他检测带T线或与质控带C线能形成免疫复合物的蛋白。

(3)结合垫(2)制备：玻璃纤维膜或聚脂膜作为结合垫，将步骤(1)制备的胶体金标记物或胶乳标记物，喷涂在玻璃纤维膜或聚脂膜上，干燥备用。

步骤3.分析膜(3)制备

A.检测带T线(4)制备：根据结合垫标记蛋白类型选择检测带T线包被蛋白，如结合垫上的结合蛋白含I2，检测带T线的包被蛋白是抗人IgA抗体。如果结合垫上含有抗人IgA抗体，检测带T线包被蛋白为I2抗原蛋白。

B.质控带C线(5)制备：根据结合垫的标记蛋白类型选择质控带的包被蛋白，如结合垫标记蛋白是单一的I2，质控带C线的包被蛋白为抗I2的抗体；如果结合垫标记蛋白是单一的抗人IgA抗体，质控带C线的标记蛋白为对应的抗人IgA抗体的抗体；结合垫标记蛋白有2层时，质控带C线的包被蛋白是能与结合垫对应层结合蛋白形成免疫复合物的蛋白。

步骤4.样品垫制备

将玻璃纤维膜或聚酯膜经缓冲液浸渍烘干备用，或者直接使用。

步骤5.试纸条组装

把步骤1～4所制作完成的材料，按图1或图2搭接成大板，根据底板的规格切割成一定的长度和宽度，安装在底板和卡壳里。

4.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的I2抗原蛋白是把全长I2基因或者含有重要抗原表位的基因序列，克隆到原核或真核表达载体里，表达纯化获得。

5.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的I2抗原蛋白是用多肽合成仪合成含有I2重要抗原表位的I2多肽，并偶联到载体蛋白上而获得。

6.根据权利要求5所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的载体蛋白包括但不限于牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。

7.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的抗人IgA抗体为鼠源、兔源、羊源、马源、骆驼源或豚鼠源中的一种或多种多克隆抗体，或鼠源、兔源、骆驼源中的一种或多种单克隆抗体。

8.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的抗人IgA抗体的抗体是指能与该抗体形成免疫复合物的蛋白。

9.一种抗I2抗体检测方法，其特征在于，用权利要求1-8所述的免疫层析试纸条，对待检样品进行检测，具体步骤包括：

(1)样本处理：取血清、血浆或全血样本，用加样缓冲液稀释0～100倍；

(2)把上述处理过的样品滴加到试纸条的样品垫上，静置5～30分钟，观察T线和C线；

(3)结果判读：T线和C线均显现，结果为阳性；T线不显现，C线显现，结果为阴性；T线和C线均不显现或其他现象，提示试纸失效。