[发明专利]一种抗PR3-ANCA抗体检测试纸的制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析检测领域。具体而言，本发明涉及一种检测PR3-ANCA的免疫层析检测试纸的制备方法及应用。 

背景技术

炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)是一种病因尚不十分清楚的慢性非特异性肠道炎性疾病，包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn′s disease，CD)。克罗恩病于1932年由Crohn、Ginzterg和Oppenheime最早描述，故得此名。1973年，世界卫生组织医学科学国际组织委员会将本病定名为Crohn病。其特点为病因未明，多见于青年人，表现为肉芽肿性炎症病变，合并纤维化与溃疡。可侵及全胃肠道的任何部位，包括口腔、肛门，病变呈节段性或跳跃性分布，并可侵及肠道以外，特别是皮肤。临床表现因病变部位、范围及程度不同而多样化，病程缓慢，易复发。 

IBD是北美和欧洲的常见病，近30年来日本IBD发病率亦呈逐步增高趋势，我国虽尚无普通人群的流行病学资料，但近10多年来本病就诊人数呈逐步增加趋势则非常明显。IBD的临床表现复杂多样，不仅有消化道症状，还可有肠外表现。由于症状为腹痛、腹泻、便血等非特异性肠炎表现，CD与UC、以及IBD与结核性肠炎等其他肠道慢性疾病很难鉴别诊断，特别在缺乏组织学证据时，需有更多相对特异性的标志物为诊断提供帮助。研究发现，多种非侵入性的生物活性标志物对IBD的诊断及炎症活动性的评价具有重要意义。 

近年来关于血清特异性抗体标记物的研究较多，包括核周型抗中性粒细胞抗体(Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody，pANCA)、抗酿酒酵母抗体(anti-Saccharomyces cerevisiae immunoglobulin A，anti-ASCA)、抗胰腺腺泡抗体(PAB)、抗细胞外膜蛋白复合物抗体(anti-OmpC)、I2抗体等。pANCA是以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为抗原的自身抗体，与IBD相关的pANCA为非典型ANCA，在IBD中的阳性率目前的报道各不相同，UC的pANCA阳性率在27～83％之间，CD则为0～24％。造成各个实验室检测结果差异的原因可能与研究对象的种族，人群选择及研究样本量的不同有关，更主要的是与检测方法的不同有关。与UC相关的pANCA靶抗原主要是髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)和通透性杀菌蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein，BPI-ANCA)，文献报道UC患者中抗PR3-ANCA的阳性率为10～25％，以IgG型为主。文献报道抗PR3-ANCA抗体的检测方法有两种，酶联免疫吸附法(ELISA)及间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence，IFA)检测技术。ELISA法检测可用于高通量标本测定，灵敏度也比较高，目前也被广泛认 可，但其操作比较繁琐，需要多次加样洗涤及孵育步骤，完成整个实验过程需要3小时左右，需要酶标仪，对于实验人员专业技术要求比较高，同时受到各种环境条件的影响，对实验带来诸多不便。 

间接免疫荧光检测技术是把抗原细胞固定在载玻片上，荧光染色用荧光显微镜进行观察，该技术具有高特异性，但由于显微镜观察需要主观判断，对检验人员的要求高，并且依赖于荧光显微镜，使用不便。 

免疫层析法(Immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，形成肉眼可见的检测带。现有的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、彩色胶乳等等，其中以纳米金应用最为广泛，纳米金也称为胶体金。