[发明专利]抗大肠杆菌感染的治疗性单克隆抗体、产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗大肠杆菌感染的治疗性单克隆抗体、产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，还涉及与单克隆抗体特异性结合的大肠杆菌MraY蛋白的一个表位多肽。本发明属于生物技术领域。

背景技术

革兰阴性菌磷酸-N-乙酰胞壁酸酯-胸腺喷丁转位酶(MraY，即转位酶Ⅰ)由mraY基因编码，是细菌细胞壁生物合成的关键酶之一，催化第一步脂质中间代谢物的形成，是UDP-GlcNAc/MurNAc酶家族的一员：polyisoprenyl-P GlcNAc/MurNAc 1-P转位酶家族，称其为GPT酶家族。MraY是某些抗菌药物如衣霉素、胞质霉素A和脂赛霉素B的攻击靶标，胞质霉素会通过抑制MraY活性导致绿脓假单胞菌等革兰阴性菌的裂解。这显示出MraY作为新型抗菌制剂研发靶位的重要潜力。

治疗性抗体作为一类有独特优势的靶向性治疗药物，现今已经成为全球药物研发的热点之一。至2012年底，美国FDA批准上市的治疗性抗体有32个，另有350多种抗体产品正处于不同的临床试验阶段中，其中30多种进入三期临床试验。治疗感染性疾病的全人单克隆抗体中，有直接针对细菌抗原的，有针对细菌内毒素(如由默克公司开发的针对艰难梭菌肠毒素的MK-3415A)，针对炭疽杆菌的抗PA的小鼠抗体14B7、ABthrax和raxibacumab。此外还包括由赛诺菲/Kalobios共同开发的针对绿脓杆菌的KB001，由Kenta Biotech公司开发的panobacumab，由诺华公司开发的针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的Aurograb，由诺华公司开发针对念珠菌热休克蛋白90的efungumab。但以MraY为靶点的治疗性单抗药物目前未见报道。

相对于小分子药物，单抗产品最大的优点就是“精准”，能够针对特异性的靶点进行治疗；而传统化药物一般是广谱治疗，会同时作用于正常和病变组织，单抗产品的“精准”在治疗过程中减低副反应的同时增强了作用效果。同时单抗是一种“生物导弹”，可以单独使用或携带药物、毒素或放射性物质来攻击靶细胞。本发明的一种抗大肠杆菌感染的治疗性单克隆抗体能特异性结合大肠杆菌的MraY蛋白，可用于治疗大肠杆菌感染。

另外，MraY蛋白是噬菌体溶菌作用的靶点，包括phiX174噬菌体在内的多种噬菌体在感染增殖过程中通过合成溶菌蛋白抑制MraY蛋白的活性来裂解细菌从而释放子代病毒。人为控制克隆化的E基因在革兰氏阴性菌中表达，会产生菌影，其作为一种新型的疫苗及佐剂形式已经受到国内外研究者的广泛关注。但关于溶菌机制研究进展缓慢，争论不断。本发明提出的一种抗大肠杆菌感染的治疗性单克隆抗体能应用于MraY蛋白在细菌裂解过程中的表达定位研究，从而为从根本上阐明菌影的形成机制奠定基础。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种抗大肠杆菌MraY蛋白的治疗性单克隆抗体。

本发明的一种抗大肠杆菌MraY蛋白的治疗性单克隆抗体，其特征在于所述单克隆抗体由保藏编号为CGMCC No.9241的杂交瘤细胞株分泌产生。

经鉴定所述的单克隆抗体为IgG2b型，轻链属于κ型。所述的单克隆抗体能够特异性结合大肠杆菌MraY的B细胞抗原表位多肽，所述的表位多肽的氨基酸序列为PESHFSKRGTPT(SEQ ID NO.1所示)。

实验证明，所述的单克隆抗体能够在体外抑制大肠杆菌的生长，在体内抑制大肠杆菌的增殖并治疗由大肠杆菌引起的感染。

在此基础上，本发明提出了所述的单克隆抗体在制备检测大肠杆菌感染的试剂中的应用。所述的检测，包括对大肠杆菌MraY表达水平的检测，也可包括对大肠杆菌MraY的定位检测。将所述单克隆抗体应用于大肠杆菌MraY的定位研究，为寻找与确证大肠杆菌MraY提供了有力手段，也为揭示噬菌体E蛋白的溶菌机制奠定了基础；及

所述的单克隆抗体在制备抑制大肠杆菌的增殖的试剂中的应用。所述的抑制大肠杆菌的增殖包括在体内抑制大肠杆菌的增殖和在体外抑制大肠杆菌的增殖；以及

所述的单克隆抗体在制备治疗大肠杆菌感染的试剂中的应用。

本发明的目的之二是提供一种产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的一种杂交瘤细胞株，为小鼠的脾细胞与SP2/0细胞经过细胞融合产生的杂交瘤细胞株，命名为M-H11，分类命名为杂交瘤细胞株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，其菌种保藏编号为：CGMCC No.9241，保藏日期为2014年5月28日。