[发明专利]一种检测曲霉属产毒真菌的LAMP通用引物及包含该引物的试剂盒

权利要求书

1.一种检测曲霉属产毒真菌的LAMP通用引物，其特征在于，其中包括：

外侧正向引物F3：5’-TTGGTGGTGGTATTGCCAA-3’；

外侧反向引物B3：5’-GACGTGCATGTTGAGGCC-3’；及

内侧正向引物FIP：5’-CAGAACAGGGGCGACCTCAC-CTTCACCAACGTTGCTTCGA-3’；

内侧反向引物BIP：5’-AGCACAAGGTCCAGATCTGGGT-TCCTCACCAACGGACTTGA-3’；

以及环引物LF：5’-GCACGGATGACACCCTTG-3’；

环引物LB：5’-CCGTCGTGCTGGTCCTA-3’。

2.一种包含权利要求1中所述LAMP通用引物的检测曲霉属产毒真菌的试剂盒，包括 LAMP通用引物、BstDNA聚合酶、含dNTPs的反应缓冲液和去离子水，其特征在于，其中 包括的LAMP通用引物为权利要求1中所述LAMP通用引物。

3.根据权利要求2所述的检测曲霉属产毒真菌的试剂盒，其特征在于，所述的含dNTPs 的反应缓冲液包含dNTPs2.8mmol/L、40mmol/LpH8.8的Tris-HCl、20mmol/LKCl、20 mmol/L(NH₄)₂SO₄、16mmol/LMgSO₄、0.2％吐温20以及1.6mol/L甜菜碱。

4.根据权利要求2所述的检测曲霉属产毒真菌的试剂盒，其特征在于，所述的LAMP通 用引物包括40pmol/μL引物FIP50μL、40pmol/μL引物BIP50μL、5pmol/μL引物F350μL、 5pmol/μL引物B350μL、20pmol/μL引物LF50μL、20pmol/μL引物LB50μL。

5.根据权利要求2所述的检测曲霉属产毒真菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中 BstDNA聚合酶浓度为8U/μL，含量为50μL；含dNTPs的反应缓冲液含量为1mL，去离 子水含量为1mL。

6.一种利用权利要求2中所述的试剂盒检测曲霉属产毒真菌的方法，其特征在于，包括 以下步骤：

(1)提取模板DNA；

(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，采用权利要求2中所述的检测曲霉属产毒真菌 的试剂盒进行LAMP扩增反应；

(3)LAMP扩增结果判定。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中的LAMP扩增反应体系 为25μL，各组分含量如下：

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述LAMP扩增反应的温 度为63℃，时间为60min。

9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)利用LA-320C浊度仪进行 LAMP扩增反应，通过程序显示的浑浊度鉴定所述步骤(2)中特异性扩增产物的存在。