[发明专利]一种防治柑橘黄龙病的渗透剂渗透效能的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种防治柑橘黄龙病的渗透剂渗透效能的检测方法，属于农业技术领域。

背景技术

柑橘黄龙病是世界柑橘生产上的毁灭性病害，是由一种限于韧皮部内寄生的革兰氏阴性细菌(Ca.Liberibacter)引起，能够侵染包括柑橘属、枳属、金柑属和九里香等多种芸香科植物。柑橘感染黄龙病后形成均匀黄化型或者斑驳型黄稍，后期则呈现缺锌花叶等一系列典型病症，表现为经济寿命短、产量低、果实品质劣，造成巨大的经济损失。

自20世纪初在我国华南地区首次报道以来，在世界各大柑橘产区相继发生，特别对世界主要的两大柑橘主产区美国佛罗里达州和巴西圣保罗州的柑橘产业造成重大经济损失。目前，该病主要分布在亚洲、非洲、大洋洲、南美洲和北美洲的近50个国家和地区，中国19个柑橘生产省(市、自治区)中已有11个受到该病危害，其面积占柑橘总栽培面积的80％以上、产量占总产量的85％左右，严重制约柑橘产业的健康发展。

化学治疗被认为是一种防治柑橘黄龙病的有效手段，通过叶面喷施药物防治作物病害已经得到广泛的应用。但是由于柑橘黄龙病病原菌寄生于柑橘韧皮部内，有效药物必须透过柑橘叶片表皮，才能进入柑橘韧皮部内。柑橘叶片表皮主要由蜡质层、几丁质层和果胶层组成，其中表皮蜡质是覆盖在叶片表面的一层疏水屏障，阻碍外界物质透过叶片表皮进入柑橘体内。渗透剂能够改变表皮蜡层的结构和性质、增加叶片表面张力，从而提高其表皮的渗透能力。因此，使用渗透剂作为辅剂，改变柑橘表皮蜡质的性质，能有效提高药物透过表皮运输到柑橘韧皮部的效率。

目前未见有适用于黄龙病感病植株叶片表皮渗透剂应用的相关文献报道。本领域技术人员长期希望找到一种检测防治柑橘黄龙病的渗透剂渗透效能的方法和指标，用于快速、准确、有效地筛选出具有强大黄龙病感病植株叶片表皮渗透能力的渗透剂，应用于有效药物的透皮转运，以达到防治黄龙病的最终目的。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种检测防治柑橘黄龙病的渗透剂渗透效能的方法和指标，用于快速、准确、有效地筛选出具有强大黄龙病感病植株叶片表皮渗透能力的渗透剂，应用于有效药物的透皮转运，达到防治黄龙病的最终目的。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种渗透剂渗透效能的检测方法，包括以下步骤：

(1)用黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片表皮将一个容器隔离成两个互相独立的腔室，用硅胶密封固定叶片表皮与容器连接处，两个互相独立的腔室一个作为供体室，另一个作为受体室；

(2)在受体室中加入含有渗透剂的硼酸缓冲液；

(3)在供体室中加入含有标记物的柠檬酸缓冲液；

(4)将该装置放置暗处，并在摇床上进行渗透；

(5)分别在放置后的0min、15min、30min、45min和60min,利用分光光度计测定受体室中标记物的含量，并根据公式(a)计算出渗透参数P的值，

P＝F/cA        (a)

其中，P为渗透参数；F为标记物透皮运输的线性斜率；c表示供体室中标记物的浓度，单位为mol·cm^-3；A为分离表皮在渗透系统中的实际面积，单位为cm²；

(6)渗透参数P的值用于评价渗透剂的渗透效能，P值越大，则渗透剂渗透效能越好。

所述柑橘叶片表皮通过如下方法分离：

选取黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片，将该叶片完全浸没在50mM、pH值为4.0的柠檬酸缓冲液中培养，直到表皮完全从叶片分离，再用50mM、pH值为4.0的柠檬酸缓冲液将离体表皮漂洗干净，并晾干。

所述柠檬酸缓冲液含有2％的果胶酶和0.2％的纤维素酶。

所述硼酸缓冲液的浓度为50～100mM，硼酸缓冲液的pH值为8.0～10.0。

所述柠檬酸缓冲液的浓度为10～20mM，柠檬酸缓冲液的pH值为2.0～4.0。

所述标记物为4-硝基酚。

利用分光光度计测定受体室中4-硝基酚的含量时，选择波长为399nm。

与现有技术相比较，本发明具备的有益效果：

针对黄龙病感病的芸香科柑橘亚科植物叶片表皮的特性，提供一种检测防治柑橘黄龙病的渗透剂渗透效能的方法，该方法步骤简单，试剂易于配制，渗透效能指标的可靠性高，可以快速从众多渗透剂中筛选出一种高效渗透剂，有助于提高药物的透皮运输效率，提高柑橘黄龙病的防治效果。

附图说明