[发明专利]一种检测人乳头瘤病毒的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测人乳头瘤病毒的试剂盒，其包括如下组分：预处理液、前处理液、杂交液和后处理液；其中，所述杂交液包括碱性磷酸酶标记链霉亲和素和用于检测人乳头瘤病毒的生物素标记的DNA探针。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记链霉亲和素在杂交液中的浓度为5ng/ml～50ng/ml，优选为10ng/ml～40ng/ml，更优选为15ng/ml～30ng/ml。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的DNA探针在杂交液中的浓度为0.1～5pmol/ml，优选为0.2～2pmol/ml，更优选为0.25～1pmol/ml。

4.一种检测人乳头瘤病毒的试剂盒，其包括如下组分：预处理液、前处理液、杂交液、后处理液、碱性磷酸酶标记链霉亲和素以及用于检测人乳头瘤病毒的生物素标记的DNA探针溶液。

5.根据权利要求1～4中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理液包括封闭剂和非离子型表面活性剂；其中，所述封闭剂为酪蛋白和/或牛血清白蛋白，所述非离子型表面活性剂为吐温和/或曲拉通；在所述预处理液中，封闭剂占预处理液的1～5％(w/v)，非离子型表面活性剂占预处理液的0.05％～1％(v/v)；优选地，封闭剂占预处理液的2～4％(w/v)，非离子型表面活性剂占预处理液的0.05％～0.2％(v/v)。

6.根据权利要求1～5中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理液还包括阴离子型分散剂和阴离子型聚丙烯酰胺；其中，所述阴离子型分散剂选自木质素磺酸盐，优选木质素磺酸钠；在所述预处理液中，阴离子型分散剂占预处理液的0.05％～0.2％(w/v)，阴离子型聚丙烯酰胺占预处理液的0.02-0.5％(w/v)；优选地，阴离子型分散剂占预处理液的0.1％～0.2％(w/v)，阴离子型聚丙烯酰胺占预处理液的0.1-0.3％(w/v)。

7.根据权利要求1～6中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理液的PH为7.0～8.0。

8.根据权利要求1～7中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述前处理液为PH7.5～9.0的缓冲溶液，所述缓冲溶液选自巴比妥钠-盐酸缓冲溶液、Tris-盐酸缓冲溶液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液和硼酸-硼砂缓冲溶液。

9.根据权利要求1～8中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述后处理液包括C₈～C₁₈烷基葡萄糖苷，优选C₉～C₁₃烷基葡萄糖苷；所述烷基葡萄糖苷占后处理液的0.1～5％(w/v)，优选0.5～2％(w/v)。

10.根据权利要求1～9中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述后处理液的PH为9.0～10.0。

11.根据权利要求1～10中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述杂交液还包括锌离子、镁离子、非离子型表面活性剂和阳离子型聚合物；其中，所述非离子型表面活性剂为吐温和/或曲拉通，所述阳离子型聚合物选自阳离子聚丙烯酰胺、多聚赖氨酸和聚合氯化铝。

12.根据权利要求1～11中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，在所述杂交液中，锌离子为0.001～0.1mol/L，镁离子为0.001～0.1mol/L，非离子型表面活性剂占杂交液的0.1～0.5％(v/v)，阳离子型聚合物占杂交液的0.01～0.1％(w/v)；优选地，锌离子为0.004～0.05mol/L，镁离子为0.004～0.05mol/L，非离子型表面活性剂占杂交液的0.2～0.4％(v/v)，阳离子型聚合物占杂交液的0.02～0.06％(w/v)。

13.根据权利要求1～12中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的DNA探针是5’端生物素标记的寡核苷酸探针。