[发明专利]与大豆抗疫病基因RpsZS18共分离的分子标记及其应用

权利要求书

1.与大豆抗疫病基因RpsZS18共分离的分子标记ZCindel246000，其特征在于，所述分子标记位于大豆2号染色体的SSR标记ZCSSR33和ZCSSR46之间，用于特异性PCR扩增分子标记ZCindel246000的引物对为：

上游引物F:5’-CAGATAGAGTTTTCCTACACAGG-3’和

下游引物R：5’-AGTAGAAGCAAAGAGGGACT-3’；

扩增产物大小为279bp；

其中，SSR标记ZCSSR33和ZCSSR46的信息如下：

SSR标记ZCSSR33位于大豆2号染色体的起止位置为43410490～43410642bp，用于扩增标记ZCSSR33的引物为上游引物5’-CATTATTTCTTGTGGGT-3’A和下游引物5’-TGACAACATAGAACCAAA-3’，扩增产物大小为153bp；

SSR标记ZCSSR46位于大豆2号染色体的起止位置为43522898～43523091bp-3’，用于扩增标记ZCSSR46的引物为上游引物5’-AAAGGGAGAAGCAAGTAAT-3’和下游引物5’-TCGCAAACAGTAAACACG-3’，扩增产物大小为194bp。

2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，进行PCR扩增使用的退火温度为58.4℃。

3.权利要求1或2所述分子标记在鉴定抗疫病大豆品种中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测大豆的基因组DNA；

2)以待测大豆的基因组DNA为模板，利用权利要求1或2所述引物F和R，进行PCR扩增反应；

3)检测PCR扩增产物，如果能够扩增出279bp的产物，则判定待测大豆为抗疫病品种。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2)中PCR扩增反应使用的扩增体系以10μl计为：大豆基因组DNA模板浓度2ng/μl，2×PCR MasterMix 4μl，引物F和R各0.2μmol/L，用ddH₂O补足至10μl。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2)中PCR扩增反应使用的反应条件为：95℃3分钟；94℃45秒，58.4℃45秒，72℃45秒，共35个循环；72℃10分钟。

6.用于PCR检测抗疫病大豆的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1或2所述的用于特异性PCR扩增分子标记ZCindel246000的引物对；其中，用于特异性PCR扩增分子标记ZCindel246000的引物对为：

上游引物F:5’-CAGATAGAGTTTTCCTACACAGG-3’和

下游引物R：5’-AGTAGAAGCAAAGAGGGACT-3’。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液和标准阳性模板。

8.权利要求1或2所述分子标记在大豆抗疫病分子育种中的应用。