[发明专利]一种19F核磁共振探针及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于纳米探针技术领域，具体涉及用于体外和活细胞内弗林蛋白酶活性检测的¹⁹F核磁共振探针及其制备方法。

背景技术

英国《自然》杂志化学子刊(Nat.Chem.，2009，Vol.1(7),P.557)公开了一种利用¹⁹F核磁共振信号的出现/消失来检测和显像蛋白质的自组装¹⁹F核磁共振纳米探针及其制备方法。这种探针自组装后¹⁹F核磁共振信号消失，而结合靶蛋白后解组装又使得¹⁹F核磁共振信号恢复。虽然该探针能够检测某些特定的蛋白，但要求靶蛋白与小分子配体能够特异性结合，这就限制了该探针的应用。英国《自然》杂志化学子刊(Nat.Chem.，2010，Vol.2(3),P.54)报道了关于氰基-半胱氨酸缩合反应的研究与应用，依据此反应平台，目前已有中国专利申请号为201210342504.2的《一类磁共振成像显像剂和双光子成像显像剂及其制备方法》以及申请号为201210164547.6的《一种单光子发射计算机断层成像显像剂及其制备方法》，它们与¹⁹F核磁共振属于完全不同的成像领域。但由于生物体背景中存在大量的水质子，所以申请号201210342504.2中的显像剂具有对比度-噪声比低的缺陷，且其使用的显像剂为金属钆的螯合物，具有一定的生物毒性。而申请号201210164547.6中使用的显像剂为具有放射性的碘元素，也会对生物体造成伤害。

发明内容

本发明的目的是提出一种¹⁹F核磁共振探针及其制备方法，以获得能实时控制性自组装的¹⁹F纳米探针，用于体外和活细胞内弗林蛋白酶活性检测，克服传统探针制备难度高，细胞摄取率低等缺点，可用于研究肿瘤细胞内弗林蛋白酶的活性，从而能够实施非侵入、直观、快速地进行疾病的早期诊断。

本发明的¹⁹F核磁共振探针的制备方法，其特征在于：

第一步、先采用固相合成方法分别合成两段肽链，过程如下，按：将1毫摩尔2-氯三苯甲基氯树脂在4-6毫升N，N-二甲基甲酰胺里溶胀4-8分钟后，加入2毫摩尔第一个氨基酸赖氨酸，再加入2毫摩尔N，N-二异丙基乙胺，反应2-3小时后，用100微升甲醇反应10-20分钟，切去赖氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第二个氨基酸半胱氨酸反应2-3小时，切去半胱氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第三个氨基酸精氨酸反应2-3小时，切去精氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第四个氨基酸精氨酸反应2-3小时，切去精氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第五个氨基酸缬氨酸反应2-3小时，切去缬氨酸的保护基，再加入活化的1.6毫摩尔第六个氨基酸精氨酸反应3-4小时，切去最后一个氨基酸精氨酸的保护基，加2-3毫摩尔醋酐反应20-30分钟，最后用含体积浓度为1％的三氟乙酸的二氯甲烷从该树脂上切下上述合成的肽段，用乙醚层出冷冻离心倾去上层乙醚，待溶剂挥发干之后所得到的白色固体粉末即是赖氨酸-半胱氨酸-精氨酸-精氨酸-缬氨酸-精氨酸肽段；再将1毫摩尔2-氯三苯甲基氯树脂在4-6毫升N，N-二甲基甲酰胺里溶胀4-8分钟后，加入2毫摩尔第一个氨基酸缬氨酸，再加入2毫摩尔N，N-二异丙基乙胺，反应2-3小时后，用100微升甲醇反应10-20分钟，切去缬氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第二个氨基酸精氨酸反应2-3小时，切去精氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第三个氨基酸半胱氨酸反应2-3小时，切去半胱氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第四个氨基酸精氨酸反应2-3小时，切去精氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第五个氨基酸赖氨酸反应2-3小时，切去赖氨酸的保护基，再加入活化的1.6毫摩尔第六个氨基酸精氨酸反应3-4小时，切去最后一个氨基酸精氨酸的保护基，加2-3毫摩尔醋酐反应20-30分钟，最后用体积浓度为1％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液从该树脂上切下上述合成的肽段，采用乙醚层出冷冻离心倾去上层乙醚，待溶剂挥发干之后所得到的白色固体粉末即是缬氨酸-精氨酸-半胱氨酸-精氨酸-赖氨酸-精氨酸肽段；