[发明专利]人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学检测领域，具体而言，涉及一种人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法。

背景技术

人单核细胞趋化蛋白-1(CCL2/Monocyte Chemotactic Protein-1，MCP-1)也被称为单核细胞趋化和激活因子，是趋化因子超家族中CC亚族的主要成员，具有很强的诱导和活化单核/巨噬细胞的能力。NK细胞、T细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞等细胞类型也对其有反应。人单核细胞趋化因子的cDNA编码的是一个99个氨基酸残基的前体蛋白，剪除一个23个氨基酸残基的疏水信号肽生成最终的76氨基酸残基的成熟蛋白。单核细胞、肥大细胞、成骨细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞等多只能够细胞都可生成CCL2。

CCL2是7次跨膜的G蛋白偶联受体CCR2的配体。在炎症进程中发挥重要作用，它能在炎症发生时募集炎症细胞，诱导浸润。CCL2的升高常与败血症、狼疮性肾炎、多发性硬化、急性胰腺炎、类风湿性关节炎有关。在一些肿瘤诸如胃癌、乳腺癌、卵巢癌、恶性胶质瘤、食管鳞状细胞癌发生时也能检测到CCL2的上调。

可见CCL2无论是对炎症的评估还是对肿瘤的监测都有很高的价值，将其作为疾病的指标的研究也越来越受到重视，CCL2有望成为实验室诊断的常规指标，用于肿瘤或肿瘤转移的辅助诊断。目前国外已有测定CCL2的ELISA试剂盒面市，但多为仅供科研应用，由于价格昂贵、操作耗时等因素还不适合用于临床，如R&D Systems的Immunoassay DCP00系列。而国内测定CCL2的ELISA试剂盒，虽然价格适中，但试剂盒质量不稳定，灵敏度和准确度都达不到临床应用的要求。

因此，为了解决现有技术中的上述不足，本发明提出了一种新的解决方案。

发明内容

为了解决现有技术中的上述问题，本发明一方面提供了一种人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，另一方面提供了上述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的制备和使用方法。根据本发明提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，成本低，稳定性好，具有较高的灵敏度和准确度；根据本发明另一方面提供的上述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的制备和使用方法，操作简单，步骤简化，用时较短。

本发明一方面提供了一种人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，包括：包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板，CCL2标准品，生物素标记抗人CCL2抗体，链酶亲和素标记辣根过氧化物酶。

优选地，所述CCL2标准品由重组人CCL2制备，共8瓶，其含CCL2的浓度范围为0-2000pg/ml；所述生物素标记抗人CCL2抗体的浓度为83-125ng/ml。

进一步地，所述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒还包括洗涤液、稀释液、显色液A、显色液B和终止液。

进一步地，所述洗涤液为含吐温的磷酸盐缓冲液，所述稀释液为含BSA的磷酸盐缓冲液，所述显色液A为含H₂O₂的磷酸盐柠檬酸缓冲液，所述显色液B为含TMB的柠檬酸缓冲液，所述终止液为1-2M的H₂SO₄溶液。

本发明另一方面提供了所述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的制备方法，包括包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板的制备，CCL2标准品的制备，生物素标记抗人CCL2抗体的制备，链酶亲和素标记辣根过氧化物酶的制备。

进一步地，包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板的制备过程为：取空白酶标反应板，每孔加入100-200μl的鼠抗人CCL2单克隆抗体，室温过夜孵育，弃去孔内液体，拍干后进行封闭。

进一步地，所述封闭过程为：每孔加入250-350μl封闭液，孵育后弃去孔内液体，拍干后风干。

可选地，所述封闭过程中的孵育条件为37℃孵育2个小时或者4℃过夜孵育。

优选地，包被的所述鼠抗人CCL2单克隆抗体的浓度为2000-2500ng/ml，所述封闭液为含有BSA和蔗糖的0.01M的磷酸盐缓冲液。

本发明又一方面提供了一种检测人血清中CCL2含量的方法，使用所述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，包括以下步骤：