[发明专利]一种与人表皮生长因子受体III型突变体特异性结合的核酸适配子及其应用

说明书

本发明专利申请是申请日为：2013年05月07日，申请号：201310165292.X，发明名称为：一种与人表皮生长因子受体III型突变体特异性结合的核酸适配子及其应用的分案申请。

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种与人表皮生长因子受体III型突变体特异性结合的核酸适配子及其应用。

背景技术

指数富集配基的系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)技术是20世纪90年代初研制的一种新的组合化学技术，由美国的Gold和Ellington等受组合化学等的启发，构建的一种新型的体外筛选技术^[1-3]，通过该技术筛选获得的寡核苷酸被称为适配体(aptamer)。它通过在体外合成大容量的随机寡核苷酸文库，结合体外PCR扩增技术，与靶分子经过多轮筛选，获得高亲和力、特异性强的寡核苷酸适配子(aptamer)，其靶分子包括金属离子、药物、氨基酸、碱基类似物、核苷酸和多肽等，其中蛋白质类靶分子最多，包括酶、生长因子、抗体、转录因子、细胞粘附分子和选择素等^[4-5]。这种筛选方法具有简便、快速、经济等特点，与其他组合化学库如随机肽库、抗体库等文库相比，从寡核苷酸文库中筛选出的适配子具有更高的亲和力和特异性，具有良好的应用前景。Cell-SELEX技术是在SELEX技术的基础上发展来的，可以在筛选细胞特定靶分子未知的条件下进行筛选，大大提高了细胞筛选的效率和靶标的范围。与传统的SELEX技术相比，以完整细胞为靶分子的SELEX具有如下一些优点：1)筛选的靶分子范围广，可以使蛋白、肽、完整的细胞和细菌病原体，甚至在临床的病理组织切片也可以直接作为靶分子进行筛选^[6]；2)可以对多个靶分子同时进行筛选，同步并行的筛选方法将大大的提高工作效率，缩短筛选周期^[7]；3)细胞中的蛋白质可以保持其天然的构像，而非孤立的纯化蛋白，因此能够更真实地反应出蛋白的一些特性^[8]；4)消减策略的引进使筛选到的适配体结合特异性更强，通过反向SELEX筛选，可以有效减弱甚至消除既与靶分子结合又与靶分子类似物的结合的寡核苷酸配基，从而筛选出高度特异性结合靶分子的适配体^[9]。

在肿瘤细胞和正常细胞表面及细胞内部存在许多相同的成分和差异分子，以完整细胞为靶分子的SELEX技术可以筛选出能区别两个高度同源但有微小差异的靶组织或完整靶细胞的特异性寡核苷酸配基。筛选获得的适配体不仅可以作肿瘤特异性诊断或导向治疗，而且还可以用于肿瘤特异性标志物的鉴别和钓取^[10]。因此应用Cell-SELEX技术和消减SELEX技术对胶质瘤细胞的靶标筛选和研究对胶质瘤的临床诊断和治疗及肿瘤基础研究有很大的应用价值和前景。