[发明专利]一种低分子量肝素亲和纯化介质和纯化低分子量肝素方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种低分子量肝素亲和纯化介质、由该介质形成的亲和纯化聚乙烯亚胺葡萄聚糖微球及低分子量肝素亲和纯化方法。

背景技术

肝素钠是猪的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的钠盐，属粘多糖类物质。肝素是有六糖或八糖重复单位组成的线性链状分子。三硫酸双糖单位是肝素的主要双糖单位，L-艾杜糖醛酸是此双糖的糖醛酸，二硫酸双糖的糖醛酸是D-葡萄糖醛酸，三硫酸双糖和二硫酸双糖以约3：1的比例交替联结。肝素钠白色粉末，有引湿性，对热稳定。溶于水，不溶于丙酮等有机溶剂。分子量一般在8000～25000道尔顿，平均分子量约为13000道尔顿，肝素是趋于螺旋形的纤维状分子，与其它粘多糖相比，其特性粘度较小，为0.1～0.2，有旋光性。肝素在185～200nm有特性吸收峰，在230～300无光吸收。如有杂蛋白在，则最大吸收在265～292nm，最小吸收在240～260nm。肝素在红外890、940cm-1有特征吸收峰，测定1210～1150cm-1吸收强度，可作快速分析用。肝素的O-硫酸基在低温时对酸水解相当稳定，但N-硫酸基对酸水解敏感。在碱性条件下，N-硫酸基相当稳定。肝素与氧化剂反应，可能被降解成酸性产物。还原剂的存在，不影响肝素的活性。肝素具有抗凝血作用，肝素在体内外均能延长凝血时间，肝素能降低LDL、VLDL和乳糜微粒(CM)，升高HDL，对防止动脉粥样硬化有多方面的有益作用，肝素能减少红细胞的凝聚作用，使全血粘度和血浆粘度降低，有利于防止血栓性疾病。

普通肝素用于临床至今已有近70年的历史，近年来其地位逐渐被近十年发展起来的新一代肝素类抗凝药物——低分子量肝素所取代。低分子量肝素具有效价高，副作用低的优点。目前，低分子量肝素已经占据了肝素类药品市场的绝大部分比重(90％)。

目前国外市场已有8种低分子量肝素药物上市，分别为依诺肝素钠、那曲肝素钙、亭扎肝素钠、帕肝素钠、达肝素钠、贝米肝素钠、舍扎肝素钠、阿地肝素钠等。化学法生产低分子量肝素主要是利用亚硝酸钠、双氧水等化学试剂降解肝素，化学法是随机降解，没有选择性，特异性差，会作用于肝素分子的抗凝活性五糖核心基团，使得抗Factor Xa活性下降，产生没有抗凝效果的副产物，因此需要对低分子量肝素进行高效的纯化，提高效价，降低副作用风险。

目前，低分子肝素钠的纯化主要是基于氧化法，以有机溶剂分级沉淀获得，这类方法存在以下缺陷：1.氧化剂难以清除；2.低分子肝素钠的结构易于破坏。因此，限制了大规模快速高效制备低分子量肝素钠的生产。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中的不足，提供一种高效、快速可大规模分离纯化低分子肝素钠的介质和方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现

1、本发明提供一种低分子量肝素亲和纯化介质，该介质包含三个组成部分：聚乙烯亚胺、交联物质和微球结构；其中，交联物质包括交联剂和表面活性剂，微球结构包括微球和微球载体。

2.上述1提供的低分子量肝素亲和纯化介质，其中，聚乙烯亚胺为分枝状形式；交联剂为5-胺基－1－戊醇，1,4-丁二醇双丙烯酸酯，1,3-丁二醇双丙烯酸酯或1,3-丁二醇双丙烯酸酯的衍生物；微球为葡萄聚糖。

3.上述2提供的低分子量肝素亲和纯化介质，其中，表面活性剂为叶酸聚氧乙烯醚类，微球载体大小为150-200微米。

4.包括上述1-3任一项提供的低分子量肝素亲和纯化介质的亲和纯化聚乙烯亚胺葡萄聚糖微球，其中，亲和纯化聚乙烯亚胺葡萄聚糖微球的分子量为13万至20万道尔顿。

5.上述4提供的亲和纯化聚乙烯亚胺葡萄聚糖微球在纯化低分子量肝素上的应用。

6.本发明还提供一种纯化低分子量肝素的方法，该方法包括如下步骤：5％氯化钠溶液使肝素降解产物低分子量肝素粗品完全溶解；盐酸调节pH至4.0-5.0；加入亲和纯化聚乙烯亚胺葡萄聚糖微球，搅拌，静置沉淀12小时，微球沉淀后去除上清，1M的氯化钠漂洗2次，然后用2M氯化钠洗脱；在溶液中加入10％质量比的固体氯化钠搅拌溶解。向浓缩液中加入体积比35-50％的乙醇，静置2小时收沉淀得纯化的低分子量肝素。

本发明的有益效果：