[发明专利]一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2及其指纹图谱以及栽培方法有效
| 申请号： | 201410421601.X | 申请日： | 2014-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN104726344B | 公开（公告）日： | 2019-10-22 |
| 发明（设计）人： | 尚晓冬;章炉军;张美彦;于海龙;宋春艳;谭琦 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院;上海炎地农业科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;A01H15/00;C12Q1/6895;A01G18/00 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 适于 香菇 工厂 栽培 菌种 f2 及其 指纹 图谱 以及 方法 | ||
1.一种鉴定香菇工厂化栽培菌种沪F2的方法，其具体步骤如下：
(1)菌丝培养：将香菇菌种转接到马铃薯葡萄糖培养基中，23℃～25℃下避光摇瓶培养，3d～4d后收集菌丝；
(2)基因组DNA的提取：用CTAB法提取上述菌丝的基因组DNA，紫外分光光度法检测总基因组DNA浓度和纯度，调整样品DNA的浓度一致；
(3)SSR分子标记的检测：对上述提取的DNA进行基因SSR标记的PCR扩增，PCR扩增体系：总体积20μL，包括：10×PCR buffer 2μL，25mmol/L MgCl2 2μL，10mmol/L dNTP 0.4μL，5U/μL Taq DNA酶0.2μL，10μmol/L SSR标记正向引物和反向引物总体积各1.5μL，浓度20ng～30ng/μL提取的模板DNA 2μL，ddH2O 10.4μL；
PCR反应条件：94℃5min；94℃30second，55℃30second，72℃30second，30个循环；72℃5min；
(4)电泳检测，银染，显色，拍照，分析结果：
采用4对SSR引物对香菇菌株进行PCR扩增，通过对照50bp DNA ladder可确定各SSR引物扩增的等位片段的数量和相对分子量，符合编号组合为：01(3+4)(1)的菌种，即可确定该菌种为香菇“沪F2”菌种；其中，所述4对SSR引物序列如下：
Le_fp0004正向引物：CCCAAAAAGGATTTCAGCAA；
反向引物：AACCGGAGTGGTGTAAGTGC；
Le_fp0007正向引物：CATTGCTCGGATCCTTCATT；
反向引物：TACCTCGTGCGGACTTTGAT；
Le_fp0008正向引物：CTCTTTGCACCCTCAACCTC；
反向引物：CAGCAGTCTCCTCTTGGCTC；
Le_fp0009正向引物：AAGCAGGTCAGAGCAGGTTC；
反向引物：ACCGAGAGCAGAGTCGAGAG；
编号组合01(3+4)(1)的含义如下表所示：
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