[发明专利]工程化抗体恒定结构域分子

权利要求书

1.一种包含IgG的免疫球蛋白CH2结构域的多肽，其中所述CH2结构域包含约1个至约7个氨基酸的N端平截，并且其中所述多肽具有小于约15kD的分子量。

2.权利要求1的多肽，其包含约7个氨基酸的N端平截。

3.权利要求1或2的多肽，其中(i)所述CH2结构域的环的至少一个被突变；(ii)所述CH2结构域的环区域的至少一部分被来自异源免疫球蛋白可变结构域的互补决定区(CDR)或其功能片段置换；或者(iii)二者兼有，并且其中所述多肽特异性结合抗原。

4.权利要求3的多肽，其中：

(a)所述CH2结构域的环1被突变；

(b)所述CH2结构域的环2被突变；

(c)所述CH2结构域的环3被突变；

(d)所述CH2结构域的环A-B被突变；

(e)所述CH2结构域的环C-D被突变；

(f)所述CH2结构域的环E-F被突变；

(g)所述CH2结构域的环A-B被CDR置换；和/或

(h)所述CH2结构域的环E-F被CDR置换。

5.权利要求4的多肽，其中(g)或(h)中的所述CDR是CDR3。

6.权利要求1-5任一项的多肽，其中所述CH2结构域还包含1个至4个氨基酸的C端平截。

7.权利要求1-6任一项的多肽，所述多肽具有12kD至14kD的分子量。

8.权利要求1-7任一项的多肽，其中所述CH2结构域是非糖基化的。

9.权利要求1-7任一项的多肽，其中所述CH2结构域是糖基化的。

10.一种核酸分子，其编码权利要求1-9任一项的多肽。

11.一种载体，所述载体包含权利要求10的核酸分子。

12.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求11的载体。

13.一种组合物，其包含权利要求1-9任一项的多肽和药学上可接受的载体。

14.一种组合物，其包含与效应物分子或可检测的标记结合的权利要求1-9任一项的多肽。

15.一种鉴定特异性结合靶抗原的重组CH2结构域的方法，所述方法包括：

(a)提供在它们的表面上展示重组IgG CH2结构域的噬菌体粒子的文库，其中所述CH2结构域包含7个氨基酸的N端缺失，并且其中所述CH2结构域具有小于15KD的分子量，其中所述文库是通过以下产生：

(i)提供编码CH2结构域的遗传多样性群体的核酸分子的文库，其中所述遗传多样性群体是通过将突变引入CH2结构域的一个或多个环区域中来提供，其中所述环区域选自环1、环2和环3，并且其中将突变引入一个或多个环区域中包括用A，Y，D或S残基随机置换所有的环残基，以及在每个环的C-端末端插入另外的G残基；并且

(ii)在重组的宿主细胞中表达所述核酸分子的文库，从而将CH2结构域表达在所述粒子的表面上，并且所述CH2结构域的核酸分子被所述粒子的遗传材料编码；

(b)将所述粒子的文库与所述靶抗原接触以选择特异性结合所述靶抗原的粒子；以及

(c)从表达特异性结合所述靶抗原的CH2结构域的粒子中克隆CH2结构域核酸分子，由此鉴定特异性结合所述靶抗原的CH2结构域。

16.一种制备IgG的重组CH2结构域的文库的方法，所述方法包括(i)将突变引入CH2结构域支架的一个或多个环区域中，其中所述环区域选自环1、环2和环3，并且其中将突变引入一个或多个环区域中包括用A，Y，D或S残基随机置换所有的环残基，以及在每个环的C-端末端插入另外的G残基，或者(ii)用来自异源免疫球蛋白重链可变(VH)结构域的CDR3置换所述CH2结构域支架的环A-B或环E-F的一部分，其中所述CH2结构域支架还包含7个氨基酸的N端平截。

17.权利要求16的方法，其中所述CH2结构域支架还包含1个至4个氨基酸的C端平截。

18.一种鉴定特异性结合靶抗原的重组CH2结构域的方法，所述方法包括使通过权利要求16或17的方法产生的文库与所述靶抗原接触以选择特异性结合所述靶抗原的重组CH2结构域。