[发明专利]一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法有效
| 申请号： | 201410422797.4 | 申请日： | 2014-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN104145944A | 公开（公告）日： | 2014-11-19 |
| 发明（设计）人： | 宋爱环;邹琰;李翘楚;王英俊;辛美丽;卢珺;韩龙江;刘洪军 | 申请（专利权）人： | 山东省海洋生物研究院 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 青岛联智专利商标事务所有限公司 37101 | 代理人： | 崔滨生 |
| 地址： | 266100 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 精子 超低温 冷冻 保存 激活 方法 | ||
1.一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：包括将魁蚶精液与抗冻液混合稀释，装入2.0ml的冻存管中，预冷后，进行分步降温冷冻，保存在液氮中，保存2周后，从液氮中取出冻存管进行解冻，然后在激活液中进行精子激活，最后进行活力检验；其中所述抗冻液由基础液、抗冻保护剂和添加剂组成；所述基础液为灭菌后的天然海水或浓度为0.5 mol/L的氯化钠溶液，所述抗冻保护剂为体积浓度为5%的二甲基亚砜，所述添加剂为海藻糖。
2. 根据权利要求1所述的一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：所述氯化钠溶液中氯化钠的加入量为58.4g/L。
3. 根据权利要求1或2所述的一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：所述抗冻液中基础液与抗冻保护剂的体积比为95%：5%。
4. 根据权利要求3所述的一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：所述添加剂海藻糖的加入量为90g/L。
5. 根据权利要求1或4所述的一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：所述精液与抗冻液的体积比为1:10。
6. 根据权利要求1所述的一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：所述预冷是在0℃预冷2-5min。
7. 根据权利要求1或6所述的一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：所述分步降温冷冻是在程序降温仪中，在-60℃前降温速率为-12℃/ min，降至-60℃时，平衡2-5min，再以-20℃/min 降温至-180℃，迅速投入液氮中保存。
8. 根据权利要求1或6所述的一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：所述解冻是将放有精液与抗冻液的冻存管于37-40℃的水浴中解冻100-110s，然后于室温下放至完全融化。
9. 根据权利要求1或6所述的一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：所述激活液为添加了胎牛血清和氯化铵的天然海水，所述胎牛血清的体积浓度为5%，所述氯化铵的添加量为0.2g/100ml。
10. 根据权利要求1或6所述的一种魁蚶精子超低温冷冻保存与激活方法，其特征在于：所述活力检测是采用计算机辅助分析法检测魁蚶精子的运动率。
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