[发明专利]一种靶向性纳米级脂质体超声造影剂及其制备方法

权利要求书

1.一种靶向性纳米级脂质体超声造影剂，其特征在于：脂质体膜材料为蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酸和胆固醇，且蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酸和胆固醇的摩尔比为：15～20∶55～65∶5～10∶10～20。

2.根据权利要求1所述的一种靶向性纳米级脂质体超声造影剂，其特征在于：所述的蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酸和胆固醇的摩尔比为17∶60∶8∶15。

3.权利要求1～2任一项所述的一种靶向性纳米级脂质体超声造影剂的制备方法，其特征为包括以下步骤：

1)纳米级脂质体超声造影剂，具体为，a.按照比例称取蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇和棕榈酸混合放置于试管中；b.向上述混合物中加入氯仿溶液，混合物与氯仿溶液的质量体积比为1ml/mg，使用漩涡混合器振动1min后使其完全溶解，将此混合液放入-80℃冰箱冷冻36h；c.将冷冻成固体的脂质体混合物放入冻干机中真空干燥处理6h，去除三氯甲烷，成均匀稳定的脂质膜；d.在所得脂质膜中加入去离子水10ml/mg，然后将其放入温育箱中温育30min使脂质膜充分溶解于去离子水中，用超声波破碎仪对此混悬液进行超声处理；e.等体积甘露醇混入脂质体混悬液中，用-196℃液氮将其速冻成固体，然后放入冻干机中冻干24h形成脂质微粒冻干粉，以备下一步使用；f.将脂质体冻干粉中加入磷酸缓冲液，震荡摇匀既得纳米级脂质体超声造影剂；

2)靶向性纳米级脂质体超声造影剂的制备。

4.根据权利要求3所述的一种靶向性纳米级脂质体超声造影剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤2)具体为：

a.取适量的鼠抗人IL-8单克隆抗体，溶于pH7.4的磷酸缓冲溶液中，加入异型双功能交联剂溶液，置于4℃冰箱中反应60min进行反应；

b.将反应混合物加入离心管中离心洗涤去除剩余异型双功能交联剂，在得到的带吡啶二硫基的单克隆抗体溶液中加入过量的二硫苏糖醇醋酸溶液，置于4℃冰箱中反应30min后再次离心洗涤以除去剩余的二硫苏糖醇，最后得到带巯基的抗体溶液；

c.取适量步骤1）中自制的纳米级脂质体超声造影剂悬液，加入适量异型双功能交联剂溶液，置于4℃冰箱反应60min，pH7.4磷酸盐缓冲溶液洗涤，得到带吡啶二硫基的微泡悬液，立即与带巯基的抗体溶液混合，反应后经pH7.4磷酸缓冲液再次洗涤，最终得到与IL-8单克隆抗体偶联的纳米级脂质体超声造影剂；

所述的磷酸缓冲溶液以容积比1∶15的比例加入20mmol/L的异型双功能交联剂溶液。