[发明专利]硬皮马勃菌根苗的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及菌类人工栽培领域，具体而言，涉及一种硬皮马勃菌根苗的合成方法。

背景技术

硬皮马勃是一种食、药用真菌，最早载于《名医别录》，味辛性平，入肺经，有消肿、止血、解毒等功效，用于咽喉肿痛及各种出血。现代医学研究表明,硬皮马勃具有多种药理作用和临床应用，含有甾体化合物、萜类化合物、小分子含氮化合物、马勃多糖、蛋白质、肽类等化学成分有抑菌、抗炎、止咳、杀虫、抗肿瘤细胞的作用，具有很高的药用价值。崔磊2006年报道，从马勃的新鲜子实体中分离出新蛋白质，其对小鼠脾细胞显示一种抗促细胞分裂剂活性，能减少乳腺癌细胞的生存能力。从硬皮马勃中分离得一种类似泛激素的肽，此肽对乳腺癌细胞有较强的抗增殖活性。

硬皮马勃含有丰富的蛋白质、矿物质、微量元素及氨基酸，幼嫩子实体肉质细腻，美味可口而深受广大消费者的喜爱，是老百姓餐桌上喜闻乐见的美味佳肴，又因其公认的药用价值而成为一种重要的食、药用菌倍受消费者青睐。但硬皮马勃自然产量有限且随大大量的人为采摘，资源越来越少。人工栽培是增加资源、保护生态环境，维持可持续发展的重要方向。而菌根苗合成是硬皮马勃人工栽培的首要问题，菌根苗人工合成就是建立硬皮马勃与其宿主树的共生关系，是实现硬皮马勃人工栽培的第一步。但目前很难人工合成菌根苗，或者是人工合成时菌根感染率很低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种硬皮马勃菌根苗的合成方法，以解决上述的问题。

本发明提供的硬皮马勃菌根苗的合成方法，包括下列步骤：

(1)将含有硬皮马勃子实体的组织置于母种培养基中培养，得到硬皮马勃母种，将硬皮马勃母种接种到液体菌种培养基中，培养得到硬皮马勃液体菌种；

和/或，

将硬皮马勃孢子粉配制成硬皮马勃孢子悬浮液；

(2)将思茅松、云南松或高山松的种子培养至萌发出白色芽点移栽入无菌苗培养基中培养得到无菌苗；

(3)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种硬皮马勃液体菌种或硬皮马勃孢子悬浮液，保持基质湿润，维持温度为25℃±3℃，培养得到硬皮马勃菌根苗。

本发明提供了两种硬皮马勃菌种与无菌苗接种合成菌根苗，分别为：硬皮马勃孢子悬浮液和硬皮马勃液体菌种。这样不仅丰富了硬皮马勃菌种的来源，而且硬皮马勃孢子悬浮液的制备和培养要比硬皮马勃液体菌种简单，并且菌根感染率相差无几。

本发明选择思茅松、云南松或高山松为宿主树种，通过单独培养硬皮马勃菌种和单独培养宿主树的无菌苗，并通过选择在无菌苗长出侧根时接入硬皮马勃菌种，保持基质湿润，维持温度为25℃±3℃，培养得到了硬皮马勃菌根苗。

优选地，所述液体菌种培养基包括下列组分，按重量份计：

马钤薯100-200份，葡萄糖10-20份，酒石酸铵1-2份，蛋白胨2-4份，MgSO₄1-2份，KH₂PO₄1-2份，水500-1500份；优选地，马钤薯120-180份，葡萄糖12-18份，酒石酸铵1-2份，蛋白胨2-4份，MgSO₄1-2份，KH₂PO₄1-2份，水800-1200份；

所述母种培养基为在所述液体菌种培养基各组分及用量的基础上增加15-20份的琼脂。

优选地，所述无菌苗培养基包括下列组分，按重量份计：

蛭石15000-40000份，珍珠岩20000-50000份，草炭50000-100000份，红壤土100000-300000份，腐殖质10000-30000份，磷酸二氢铵100-200份，MgSO₄100-200份，KH₂PO₄100-200份；优选地，蛭石20000-30000份，珍珠岩30000-40000份，草炭60000-90000份，红壤土150000-250000份，腐殖质15000-25000份，磷酸二氢铵120-180份，MgSO₄130-180份，KH₂PO₄120-180份；优选地，腐殖质包括牛粪。

优选地，在步骤(1)中，配制硬皮马勃孢子悬浮液的方法为：按重量份计，向50-500份硬皮马勃孢子粉中加入500-5000份无菌水，得到硬皮马勃孢子悬浮液。