[发明专利]体外酶法钾测定试剂、其制备方法及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及钾测定试剂，特别是涉及体外酶法钾测定试剂。

本发明还涉及上述体外酶法钾测定试剂的制备方法以及该体外酶法钾测定试剂的使用方法。

背景技术

人体血清中钾的含量测定是临床体外诊断测定项目之一，也是临床常规急诊诊断中不可缺少的项目。血清钾高于参考值上限，多见于肾上腺皮质功能减退，特别危重患者，血清钾上升至8mmol/L,患者可能发生心室纤颤；血清钾低于参考值下限，多见于肾小管疾病，出现严重腹泻、呕吐，肾上腺皮质功能亢进等症状。

目前医院测定血清钾多使用离子选择电极(ISE)。其电极是对钾专一性强的缬霉素膜，是比较理想的测定血清或尿中钾离子浓度方法。缬霉素膜专一性强，但使用寿命短，一般三个月左右就要更换一次。

酶法测定钾的优点是利用分光光度计原理，在全自动生化分析仪上进行测定，全自动生化仪是医院测定其它众多项目必备仪器，利用生化仪测定钾，医院不需要再购置和维护离子选择电极设备。上生化仪测定，操作方便，节省开支。酶法测定结果与离子电极法等效。同样是医院测定钾的理想方法之一。

酶法测定钾的方法是上世纪80年代末由Berry.MN等人提出的，他是利用K⁺是丙酮酸激酶的激活剂原理，建立起酶法测定血清钾的基本方法，随后德国B.M公司正式推出酶法测定钾的试剂盒，并在全世界市场上销售，受到医院的欢迎。但Berry的原理中，K⁺离子是丙酮酸激酶的激活剂，Na⁺离子也是该酶的激活剂，而且血清中Na⁺离子浓度是K⁺离子的12倍。为了保证测定K⁺离子专一性，必须去除血清中的Na⁺离子，去除Na⁺离子依靠加入一种对Na⁺专一的人工合成离子穴(Cryptand)。此离子穴价格昂贵，造成钾试剂成本奇高。这是Berry方法的不利方面。

1987年日本人Shigeki Kimura等人提出另一个测定钾的酶法原理，它利用K⁺是尿素氨基水解酶(Urea amidolyase简称UAL.EC3.5.1.45)水解尿素的激活剂原理，建立测定K⁺的方法。

起反应如下：

UAL水解Urea时需加入ATP、HCO₃^-作为底物，在Mg⁺⁺和K⁺离子激活下，生成NH₄⁺和OH⁺,生成的NH₄^-,加入a-酮戊二酸和NADH，在GLDH的作用下生成glutamate和NAD⁺,在340nm波长下，激活剂K⁺的多少与NADH下降成正比，建立起测定K⁺基本方法。

Shigeki等人的具体测定试剂分为试剂1和试剂2：各试剂内成分及浓度如下：

试剂1：

BSA(白蛋白)………………..3g/L

a-酮戊二酸…..14.4mmol/L

NADH……………………………………..0.53mm0l/L

Urea……………………………………..4.47mmol/L

NaHCO₃…………………………………….51.4mmol/L

EGTA……………………………………….0.5mmol/L

Magnesium acetate……………………..7.2mmol/L

UAL………………………………………..330.4U/L

GIDH……………………………………….43.2Ku/L

Imidazole buffer……..200mmol/L pH7.0 37℃

试剂2

BSA(白蛋白)………………………………3g/L

ATP…………………………………………9.72mmol/L

Urea……………………………………….4.47mmol/L

NaHCO₃…………………………………….51.4mmol/L

EDTA……………………………………….0.5mmol/L