[发明专利]一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用。

背景技术

板栗，俗称“铁杆庄稼”，是我国重要的木本粮食树种之一。然而，板栗贮藏期间极易发生腐变，生产中常采取化学抑菌剂处理后低温冷藏等方式进行贮藏；其贮藏成本高，并且化学试剂的使用对人类健康及环境存在安全隐患。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用，以解决上述的问题。

在本发明的实施例中提供的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)，2014年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2014112，保藏名称为蜡样芽孢杆菌CE-D10.3.2，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072。

本发明实施例提供的一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，包含以下组分：按重量百分比计，蜡样芽孢杆菌冻干粉50-70％，助剂8-12％，稳定剂0.5-1.5％，紫外保护剂0.05-0.15％，余量为载体。

优选地，所述蜡样芽孢杆菌冻干粉通过以下方法制备：

(a)、将所述蜡样芽孢杆菌培养至对数生长期，得到种子液；

(b)、将所述种子液以体积百分数为1～5％的接种量接种于种子罐中，所述种子罐的培养条件为：通气比1:0.9-1.1，搅拌转速150～200r/min，温度35～37℃，罐压0.015-0.020MPa，培养至活菌含量为1～3×10⁹cfu/ml，得到菌悬液；

(c)、在所述菌悬液中加入冷冻保护剂后放置于-75～-85℃超低温冰箱预冻2.5-3.5h；然后在-55～-65℃，真空度为95-105Pa，冻干20-30h；然后在0～45℃进行粉碎，得到所述蜡样芽孢杆菌冻干粉。

优选地，所述载体为白炭黑、轻质碳酸钙、硅藻土中的任一种。

优选地，所述分散剂为木质素磺酸钠、烷基萘磺酸缩聚物钠盐中的任一种；所述助剂包括润湿剂和分散剂，所述润湿剂为Morwet EFW和茶皂素中的任一种。

优选地，所述分散剂为木质素磺酸钠，所述润湿剂为Morwet EFW，且所述木质素磺酸钠与所述Morwet EFW的重量比为3：7～6:4。

优选地，所述稳定剂为碳酸钙或磷酸氢二钾。

优选地，所述紫外保护剂为β-环糊精。

本发明的实施例还提供了蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，将各组分混合均匀，粉碎，制得目数不大于150目的粉剂，整个制备过程中温度保持在0～45℃。

本发明还提供了蜡样芽孢杆菌在贮藏保鲜中的应用。

本发明还提供了蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂在贮藏保鲜中的应用。

本发明实施例中提供的蜡样芽胞杆菌是由板栗坚果中分离筛选而来，属于板栗内生菌，对人畜及环境无害；本发明实施例中提供的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，对板栗等果实储藏过程中常见的真菌病害，如栗疫菌、黑葡萄穗霉、腐皮镰刀菌、扩展青霉、炭疽菌和黑曲霉等具有较好的抑制作用，对人畜无毒，成本低；能够很好的解决板栗室温贮藏问题，降低储藏成本。本发明的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂在生产中没有用到有机溶剂，降低了生产过程中和产品中的污染，不会产生溶剂中毒；不会造成对人类健康的危害，以及对环境的污染等问题，具有重要的环保意义。

附图说明

图1示出了本发明实施例3中各载体、润湿剂及分散剂与蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2相容性检测数据的柱状图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例子并结合附图对本发明做进一步的详细描述。

实施例1

蜡样芽孢杆菌的筛选

蜡样芽孢杆菌CE-D10.3.2是从湖北省罗田县耐储藏板栗品种“玫瑰红”坚果中通过分离、纯化以及筛选步骤获得的。

采用形态特征、生理生化实验确定为蜡样芽胞杆菌，通过分子生物学鉴定法16S rDNA同源序列比对，比对结果为同源性为100％，最终确定该菌株为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)。

实施例2

蜡样芽孢杆菌冻干粉的制备

(1)蜡样芽孢杆菌CE-D10.3.2接种到灭菌的LB液体培养基中，37℃，100～120r/min条件下振荡培养至对数生长期，得到种子液，LB液体培养基配方为：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，pH＝7.4～7.6；